[发明专利]一种建立慢性阻塞性肺疾病叠加哮喘模型的方法

说明书

技术领域

本发明属生物医学领域，涉及呼吸系统疾病实验模型，具体涉及一种建立慢性阻塞性肺疾病(COPD)叠加哮喘模型的方法

背景技术

临床医学中，将支气管哮喘和慢性阻塞性肺疾病(COPD)分属呼吸系统不同的常见疾病，均具有气道炎症的特点，但有时二者之间的界限不很明显，特别是吸烟的哮喘患者或者是重度发作的COPD患者，都兼有哮喘和COPD的病理生理特征，其发病机制、病理生理变得更加复杂，从而给临床防治带来挑战，另有研究表明，哮喘和COPD等气道炎症性疾病，均存在HPA轴等机体应激系统的变化，但结论往往前后不一或自相矛盾，因此建立相关的动物模型并探讨其发病机制对临床COPD合并哮喘的防治具有重大意义。至今为止，国内外尚未见有相应的动物模型的建立方法及相关的研究报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种呼吸系统疾病实验模型，尤其涉及一种建立慢性阻塞性肺疾病(COPD)叠加哮喘模型的方法。

本发明针对COPD合并哮喘这一临床上常见疾病状态，提供用于一种用于基础研究的动物模型的建立方法，并评价其可靠性。本发明按时间顺序，采用内毒素并熏烟与卵蛋白致敏激发相结合的方法，从肺组织病理、气道反应性、血清中细胞因子以及下丘脑-垂体-肾上腺轴等方面评价该模型的可靠性，并与单纯的慢性阻塞性肺疾病和哮喘大鼠模型进行对比观察分析。

具体而言，本发明方法建立慢性阻塞性肺疾病(COPD)叠加哮喘模型的方法，其特征在于，其包括下述步骤：

1)制备哮喘模型，

以含卵蛋白加氢氧化铝凝胶混合液诱发哮喘；

2)制备慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型；

内毒素加熏烟诱发慢阻肺；

3)制备COPD+哮喘模型；

内毒素并熏烟与卵蛋白致敏激发COPD+哮喘；

4)气道高反应性的测定；

5)血清细胞因子及皮质酮(CORT)检测；

6)下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)mRNA检测；

7)促肾上腺皮质激素(ACTH)检测。

结果证实，本发明方法所建立的实验动物模型兼有慢性阻塞性肺疾病(COPD)和哮喘的特征性改变，并出现特征性病理生理改变的弱化或强化的现象，具有可靠性、重复性好，符合人类慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并哮喘的疾病病理生理特点等，该模型可用于慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并哮喘致病机制、预防和治疗以及药物筛选等的研究。

附图说明

图1是正常对照组肺组织病理图(20*2)。

图2是哮喘模型组肺组织病理图(20*2)。

图3是图3COPD模型组肺组织病理图(20*2)。

图4是COPD+哮喘模型组肺组织病理图(20*2)。

图5是实验气道阻力变化曲线图。

具体实施方案

实施例1

实验动物：采用健康清洁级雄性BN大鼠，体重180～220g，购自北京维通利华实验动物技术公司。动物饲养于上海复旦大学实验动物中心，饲养条件：清洁级，光照时间固定，水、食物自由摄取。

主要试剂及仪器：卵蛋白(上海丽珠东风生物技术有限公司)；氢氧化铝凝胶(Sigma.Co.)；戊巴比妥钠(上海化学试剂公司，进口分装)；IL-4、5、6、8试剂盒、IFN-γ试剂盒、TNF-α试剂盒(Biosource进口分装)；皮质酮试剂盒(R&D公司)；ACTH放免试剂盒(第二军医大学神经生物学研究所)；SN-695B型智能放免γ测量仪(上海原子核研究所朗日环仪器一厂)；DL-8R冷冻离心机(上海离心机械研究所)；FeroTec GradienPCR基因扩增仪(杭州大和热磁电子有限公司)；DYY-8型稳压稳流电泳仪(上海琪特分析仪器有限公司)；H6-1微型电泳槽(上海精益有机玻璃制品仪器厂)；倒置显微镜(Leica德国莱卡)；YS9801型医用超声雾化器(上海亿圣科技有限公司)；小型动物呼吸机(上海奥尔科特生物科技有限公司)；Powerlab生理记录仪(ADInstruments埃德仪器有限公司)；Rotor-Gene3000Real time PCR仪(Corbett Research)；引物设计软件(Primer Premier 5.0)；动物诱喘装置：不完全封闭有机玻璃箱，28×15×13cm³，箱体一端为通气孔，另一端连接超声雾化器；动物熏烟装置：完全封闭式木箱，60×80×100cm³。

制备模型：

(1)制备哮喘模型