[发明专利]携带视网膜色素上皮细胞衍生因子的超顺磁纳米载体

权利要求书

1.携带视网膜色素上皮细胞衍生因子的超顺磁纳米载体，其特征是通过纳米技术制备超顺磁纳米铁微粒，功能化修饰其表面，将视网膜色素上皮细胞衍生因子构建在含绿色荧光蛋白报告基因的腺病毒相关表达载体上，进而交联，制得所述载体，其通过下述步骤制备：

1)制备表面功能化超顺磁纳米铁微粒

利用化学共沉淀法合成纳米Fe₃O₄磁性离子，表面葡聚糖包被后，进行羧基化功能基团修饰，并利用透射电镜显示纳米磁性微粒；

2)合成人AAV-PEDF与USPIO交联制成基因载体

(1)制备PEDF-USPIO载体：

按常规方法PCR扩增PEDF cDNA，将PCR扩增出的PEDF cDNA用BamHI和NcoI双酶切后，连入真核表达载体中，构建成AAV-PEDF表达载体；

(2)PEDF-USPIO载体的核磁成像：

制得的PEDF-USPIO加入胶质瘤细胞培养基中，与细胞孵育，确定细胞内铁浓度与PEDF-USPIO的浓度以及孵育时间的关系。

2.按权利要求1所述的携带视网膜色素上皮细胞衍生因子的超顺磁纳米载体，其特征是，所述步骤2)(1)中，将PCR扩增出的PEDF cDNA用BamHI和NcoI双酶切后，连入真核表达载体AAV-GFP中，构建成AAV-PEDF表达载体；经双酶切测序正确后，取1mg磁性微球和20μgAAV-PEDF，分散在0.6ml的交联缓冲液中，50℃的振荡反应3h后，柠檬酸缓冲液室温下洗涤磁性微球3次，无糖核酸酶水在65℃洗涤2次。

3.按权利要求1所述的携带视网膜色素上皮细胞衍生因子的超顺磁纳米载体，其特征是，所述步骤2)(2)中，将50μg/mL的PEDF-USPIO加入胶质瘤细胞培养基中，与细胞孵育3至96小时，确定细胞内铁浓度与PEDF-USPIO的浓度以及孵育时间的关系。

4.按权利要求1所述的携带视网膜色素上皮细胞衍生因子的超顺磁纳米载体，其特征是，所述的真核表达载体为AAV-GFP。

5.按权利要求1所述的携带视网膜色素上皮细胞衍生因子的超顺磁纳米载体，其特征是，所述的USPIO的浓度为180μg/ml。

6.按权利要求1所述的携带视网膜色素上皮细胞衍生因子的超顺磁纳米载体，其特征是，所述的孵育时间为24小时。

7.权利要求1的携带视网膜色素上皮细胞衍生因子的超顺磁纳米载体在制备监测脑胶质瘤生长、分化或侵袭性制剂中的用途。