[发明专利]一种中国仓鼠卵巢细胞培养基及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种中国仓鼠卵巢细胞培养基及其制备方法和应用。

背景技术

中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell，CHO细胞)是目前最广泛使用的哺乳动物细胞系，已被用于生产各种基因工程蛋白产品，例如，组织纤溶酶原激活物(t-PA)、人促红细胞生成素(rHuEPO)、乙肝表面抗原(HBsAg)、人促血小板生成素(rhTPO)、各种重组抗体等。

CHO细胞的培养通常是在添加了胎牛血清或者小牛血清的合成培养基中进行。但是其中添加的血清属于成分不明确的物质，其含有很多蛋白质和其他成分不确定的大分子物质，影响产品的分离纯化，降低产品的收率和纯度。同时来源动物的血清还存在病毒感染的潜在危险。此外，血清的添加将大大增加生产的成本。因此，许多科研工作者致力于开发低血清或者无血清培养基。

美国的Casser(In Vitro Cell Devel Biol 1985，88：588)开发了一种适于CHO细胞生长的无血清培养基，以DMEM/F12为基础培养基，添加了转铁蛋白、白蛋白、胰岛素以及亚硒酸钠等多种成分，成为现在被广泛采用的无血清培养基的基础配方。但是该无血清培养基中含有转铁蛋白、白蛋白、胰岛素等动物来源的蛋白，这些蛋白不仅是潜在的污染源，也大大提高了培养基的成本，加大了分离纯化的难度。所以，科研工作者又开始寻找到了可以替代这些蛋白质的无机盐，研发出无蛋白的培养基。

美国的Leopold Grillberger(美国专利2006/0094104 A1)开发了一种适合于动物细胞培养的无蛋白培养基，该培养基不含任何动物来源的蛋白质，使用动物来源或者植物来源的蛋白水解物代替。这类无蛋白培养基虽然成本已经很低，潜在的污染危险也大大降低，但是其中仍然含有化学成分不确定的成分，仍然一定程度上限制了细胞的生长、增殖、分化调节等的研究。因此，亟待开发一种适合CHO细胞高密度培养，并且培养效果与有血清培养基、无血清培养基、无蛋白质培养基相当或更佳的无动物源成分、无蛋白质、化学成分确定的培养基。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服了现有的中国仓鼠卵巢细胞培养基化学成分不确定、使用动物源组分或者含有蛋白质，从而使培养细胞具有潜在污染威胁，且成本较高，增加分离纯化难度，一定程度限制细胞研究的发展等缺陷，提供了无动物源成分、无蛋白、化学成分确定且培养效果相当甚至优于现有培养基的一种中国仓鼠卵巢细胞培养基及其制备方法和应用。