[发明专利]一种发酵生产透明质酸发酵液的方法

权利要求书

1.一种发酵生产透明质酸发酵液的方法，以兽疫链球菌H23为发酵菌株，所述方法的步骤为：

a、将兽疫链球菌H23接种至脑心浸出粉琼脂培养基上进行培养，得到兽疫链球菌H23菌体；

b、配置种子培养基，所述种子培养基由蔗糖、酵母粉、硫酸镁、磷酸二氢钾、硫酸锰、微量元素液、缓冲液组成，所述微量元素液由氯化钙、氯化锌、硫酸锰、硫酸铜组成，所述缓冲液由磷酸氢二钠，磷酸二氢钠组成，种子培养基预先用氢氧化钠调节PH值至7.2后灭菌，将兽疫链球菌H23菌体接种至种子培养基培养，得到兽疫链球菌H23种子培养液；

c、配置发酵培养基，所述发酵培养基由蔗糖、酵母粉、硫酸镁、磷酸二氢钠、硫酸钾、精氨酸、微量元素液、缓冲液组成，所述微量元素液由氯化钙、氯化锌、硫酸锰、硫酸铜组成，所述缓冲液由磷酸氢二钠，磷酸二氢钠组成，发酵培养基预先用氢氧化钠调节PH值至7.2后灭菌，将兽疫链球菌H23种子培养液接种至发酵培养液，发酵温度为40℃，发酵完毕即可得到透明质酸发酵液。

2.根据权利要求1所述的一种发酵生产透明质酸发酵液的方法，其特征在于：

b步骤的种子培养液中蔗糖浓度为10-30g/L，酵母粉浓度为18.0-22.0g/L，硫酸镁浓度为1.0-5.0g/L，磷酸二氢钾浓度为1.0-4.0g/L，硫酸锰浓度为0.01-0.2g/L，微量元素液浓度为0.5-10ml/L，缓冲液为10-200ml/L；

所述微量元素液中氯化钙浓度为500-5000mg/L，氯化锌浓度为10-200mg/L，硫酸锰浓度为1-50mg/L，硫酸铜浓度为1-100mg/L；

所述缓冲液中磷酸氢二钠浓度为10-70g/L，磷酸二氢钠浓度为5-30g/L。

3.根据权利要求1或2所述的一种生产透明质酸发酵液的方法，其特征在于：

c步骤的发酵培养基中蔗糖浓度为30-120g/L，酵母粉浓度为18.0-22.0g/L，硫酸镁浓度为1.0-5.0g/L，磷酸二氢钠浓度为1.0-6.0g/L，硫酸钾浓度为0.5-4.0g/L，精氨酸浓度为0.01-0.2g/L，微量元素液浓度为1-10ml/L，缓冲液浓度为5-200ml/L；

所述微量元素液中氯化钙浓度为200-5000mg/L，氯化锌浓度为5-300mg/L，硫酸锰浓度为1-50mg/L，硫酸铜浓度为1-200mg/L；

所述缓冲液中磷酸氢二钠浓度为10-70g/L，磷酸二氢钠浓度为5-30g/L。

4.根据权利要求1或2所述的一种发酵生产透明质酸发酵液的方法，其特征在于b步骤中种子培养基的培养条件为培养温度37℃，震荡培养10-14小时。

5.根据权利要求3所述的一种发酵生产透明质酸发酵液的方法，其特征在于b步骤中种子培养基的培养条件为培养温度37℃，震荡培养10-14小时。

6.根据权利要求1或2所述的一种发酵生产透明质酸发酵液的方法，其特征在于c步骤中的发酵过程中，发酵搅拌速度为200-300rpm，用质量百分比浓度为30％的氢氧化钠溶液调节，使发酵培养基的PH值在7.0±0.1之间，通气量为1vvm，发酵时间为18-22小时。

7.根据权利要求3所述的一种发酵生产透明质酸发酵液的方法，其特征在于c步骤中的发酵过程中，发酵搅拌速度为200-300rpm，用质量百分比浓度为30％的氢氧化钠溶液调节，使发酵培养基的PH值在7.0±0.1之间，通气量为1vvm，发酵时间为18-22小时。

8.根据权利要求4所述的一种发酵生产透明质酸发酵液的方法，其特征在于c步骤中的发酵过程中，发酵搅拌速度为200-300rpm，用质量百分比浓度为30％的氢氧化钠溶液调节，使发酵培养基的PH值在7.0±0.1之间，通气量为1vvm，发酵时间为18-22小时。