[发明专利]一种定量检测AKAP12甲基化水平的方法及其应用

权利要求书

1.一种定量检测AKAP12甲基化水平的方法，其特征在于，对样品DNA进行修饰后，分别以样品和标准品的DNA为模板进行PCR扩增，进行高分辨率熔解曲线分析，然后根据每个标准品差异显示的荧光强度建立标准曲线，最后将样品与标准品的曲线比较获得样品AKAP12甲基化百分比。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，以甲基化敏感性高分辨融解曲线制作方法制作标准曲线。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，对样品DNA进行修饰时，将样品DNA中未甲基化的位点与甲基化的位点修饰成不同的基团。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，进行PCR扩增的引物是5’-GGCGGTTGTTTGGATTTGGGTT-3’和5’-AACACGCCCTACAACAACATCTA-3’。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，进行高分辨率熔解曲线分析的条件为：95℃2min，40℃2min预处理后，熔解温度76～88℃，每升高0.1℃采集一次数据。

6.权利要求1、2、3、4或者5所述的方法用于制备肿瘤诊断试剂。

7.权利要求1、2、3、4或者5所述的方法在制备诊断结直肠癌诊断试剂中的应用。

8.一种定量检测AKAP12甲基化水平的试剂盒，其特征是该试剂盒含有制作标准曲线的标准品、阳性质控和阴性质控反应体系。