[发明专利]添加金属离子提高灰绿霉素A产量的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种提高灰绿霉素A产量的方法，主要是通过添加金属离子(钴 离子和镍离子)在两种不同的培养基中实现灰绿霉素A产量提高的方法。属于 代谢调控优化发酵过程技术领域。

背景技术

灰绿霉素A是中国海洋大学从海洋真菌灰绿曲霉(Aspergillus glaucus) HB1-19(保藏日期2006.3.20，中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 206022)中分离出来的一种具有自主知识产权的、结构新颖的蒽醌衍生物， 具有较强的抗癌活性。灰绿霉素A以9-蒽酮为母核，分子中C-10与C-4形成 六元内酯环。经实验证明，灰绿霉素A对人肺癌A549细胞、人肝癌BEL-7402 细胞、人白血病HL60细胞和小鼠白血病P388细胞的增殖抑制，对人脐静脉 内皮细胞具有明显的增殖抑制作用和迁移抑制活性，其IC₅₀分别为0.13和0.28 μM，可作为细胞增殖抑制剂、血管生成剂或抗肿瘤剂用于抗肿瘤的研究，有 良好的医药价值和开发应用前景。

然而在灰绿曲霉(Aspergillus glaucus)HB1-19进行发酵培养时，灰绿霉素 A的产量比较低(＜15mg/L)，制约了对其进行进一步的体内外活性评价及 药代药动等药理学研究，因此提高其发酵产量是必须加以解决的首要问题。 本发明旨在通过金属离子来对该菌的代谢进行调控以实现灰绿霉素A产量的 提高，为后续的大规模发酵以及将灰绿霉素A开发为新药奠定基础。

发明内容

本发明的所要解决的技术问题在于克服灰绿霉素A发酵产量低的缺陷，提 供一种通过添加重金属离子在两种不同培养基中提高灰绿霉素A产量的方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种通过添加金属离子提高灰绿霉素A产量的方法，通过利用海洋丝状 真菌灰绿曲霉HB1-19 CCTCC M 206022为生产菌株，在发酵培养基中添加 钴离子或镍离子化合物中的至少一种来提高灰绿霉素A的产量。所述的钴离 子或镍离子化合物推荐氯化镍、氯化钴及六水合硝酸钴。

上述钴离子或镍离子化合物添加的初始时间推荐为30小时-60小时。

推荐用的两种不同发酵培养基为：

发酵培养基组成(g/l)：麦芽糖10～100，甘露醇10～100，味精5～20，KH₂PO₄0.01～2，MgSO₄·7H₂O 0.01～1，酵母膏0.3～6，酵母粉0.01～6，加人工海水至 1L；

或者发酵培养基组成(g/l)：可溶性淀粉20～100，蔗糖10～100，麦芽糖 20～100，味精0.01～3，KH₂PO₄0.01～2，MgSO₄·7H₂O 0.01～1，酵母膏0.3～6， 蛋白胨0.5～6，黄豆粉0.2～4，加人工海水至1L。

进一步推荐的两种不同发酵培养基为：

发酵培养基A组成(g/l)：麦芽糖20.0，甘露醇20.0，味精10.0，KH₂PO₄0.5，MgSO₄·7H₂O 0.3，酵母膏3.0，酵母粉3.0，加人工海水至1L。

发酵培养基B组成(g/l)：可溶性淀粉40.0，蔗糖40.0，麦芽糖30.0， 味精2.0，KH₂PO₄ 0.5，MgSO₄·7H₂O 0.3，酵母膏1.07，蛋白胨2.0，黄豆 粉1.0，加人工海水至1L。

其中人工海水配方：NaCl，24.5g；MgCl₂·6H₂O，4.98g；NaSO₄，3.92g； MgSO₄·7H₂O，3.0g；CaCl₂·2H₂O(无水CaCl₂)，1.60g(1.20g)；KCl，0.664 g；NaHCO₃，0.192g；KBr，0.096g；H₃BO₃，0.026g；NaF，0.0039g；加 蒸馏水至1000ml。