[发明专利]冬虫夏草菌的固体发酵法

权利要求书

1.一种冬虫夏草菌的固体发酵法，其特征在于该方法包括下列步骤：

一、液体菌种生产

(1)菌种：生产菌种为中国被毛孢Hirsutella sinensis；菌种经DNA指纹谱鉴定，与天然冬虫夏草的相似率为95％-100％；

(2)液体菌种生产：

①液体母种的培养：取在14～18℃下培养2-3月的中国被毛孢菌苔，切成小块，移入盛有100ml液体培养基的250ml锥形瓶中，在转速为80～200rpm的旋转式或往复式摇瓶机上振荡培养，培养温度为14～18℃，2～3周后，即可获得冬虫夏草菌的液体母种；

②液体菌种的扩大生产：将冬虫夏草菌的液体母种，移植到2～3倍量v/v的液体培养基中，继续在温度为14～18℃，转速为80～200rpm的旋转式或往复式摇瓶机上振荡培养6～8天，即得冬虫夏草菌的液体菌种；

所述液体培养基由碳源、氮源、矿物质、复合营养成分、维生素和水组成；其中碳源为下列一种或多种成分：蕈糖、蜂蜜、糖蜜和葡萄糖，含量为2.0～4.0％w/v；氮源为下列一种或多种成分：蛋白胨、酵母浸出粉、蚕蛹粉或奶粉，含量为0.1～3.0％w/v；矿物元素为磷酸二氢钾、磷酸氢二钾或硫酸镁，含量为0.01～0.1％w/v；复合营养成分为下列一种或多种成分：菇蕈、米麸、麦麸、玉米，含量为1.0～10.0％w/v；维生素为硫胺素，含量为0.001～0.01％w/v；水为饮用水，含量为83～97％w/v；液体培养基的pH值为6.0～7.0；

二、固体发酵生产：

(1)固体发酵的培养基：

固体发酵的培养基由谷物、辅料和水组成；所述谷物为大米、小米、 玉米、小麦、大麦或荞麦的一种或多种，含量为固体发酵培养基的35～40％w/w；辅料为下列一种或多种：蚕蛹粉、麦麸或玉米粉，含量为固体发酵培养基的5～15％w/w；水为饮用水，含量为固体发酵培养基的50～55％w/v；

(2)灭菌：将上述固体发酵培养基装入容器内，在1.1KG/cm2下蒸汽灭菌30～60分钟；

(3)接种：将步骤一所得的冬虫夏草菌液体菌种，灌注入上述已经灭菌並冷却的固体发酵培养基中，接种量为固体发酵培养基干重的10～50％v/w；

(4)发酵培养和采收：冬虫夏草菌的固体发酵培养，其室温控制在12～18℃，料温控制在14～18℃，相对湿度在65±10％，经8～12周发酵培养后，培养物表面的菌丝体色泽由白色转为黄褐色，这時发酵培养已成熟，即可取出作冷冻真空干燥；

(5)冷冻干燥：冬虫夏草菌的固体发酵培养物，可用冷冻真空干燥法干燥，干燥物经粉碎、过筛，即得冬虫夏草菌的固体发酵菌粉；所述固体发酵培养物的冷冻真空干燥，通过下列步骤依次进行：

1)冷冻：将新鲜的固体发酵培养物在-20～-30℃下冷冻，時间1～4h；

2)升华干燥：在真空度为30～60Pa，冷阱温度为-40～-20℃下升华干燥，時间4～7h；

3)解吸干燥：在真空度为10～40Pa，冷阱温度为-20～40℃下作解吸干燥，直至培养物中的含水量下降至3～5％。

2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤一(2)冬虫夏草菌液体菌种的生产，用血清瓶作通气培养，通气量为1∶0.2～1∶1v/v。

3.根据权利要求1所述的方法，所述步骤二(3)采用拌种法，即：液体菌种和固体发酵培养料的拌和，是在搅拌器中完成的；所述搅 拌器外形为圆筒形或圆锥形，上有投料口，下有出料口，可封闭，可耐1.1Kg/cm2压力，能通入蒸汽灭菌，单层或具夹套，搅拌器中央有搅拌轴，能将液体菌种和固体培养料拌和均匀，并能将此拌和料分批推送至发酵袋内；拌种時的液体菌种用量为：每100Kg固体发酵培养料以湿重计拌入液体菌种10±2L。