[发明专利]一种重组单纯疱疹病毒遗传操作系统及其应用

权利要求书

1.一种重组单纯疱疹病毒遗传操作系统，其特征在于，该重组单纯疱疹病毒遗传操作系统包括HSV骨架载体和穿梭质粒；所述的HSV骨架载体包含HSV基因组DNA、BAC质粒骨架、多克隆位点、真核抗性基因以及原核抗性基因，在多克隆位点和真核抗性基因的外侧融入位点特异性重组酶系统识别序列；所述的穿梭质粒是包含多克隆位点的细菌克隆载体，并且在多克隆位点外侧融入位点特异性重组酶系统识别序列。

2.根据权利要求1所述的重组单纯疱疹病毒遗传操作系统，其特征在于，所述的位点特异性重组酶系统识别序列是LoxP序列、FRT序列、attP或attB序列中的一种或者几种。

3.根据权利要求1所述的重组单纯疱疹病毒遗传操作系统，其特征在于，所述的多克隆位点含有以下一种或者几种酶切位点：HindIII、EcoRI、SacI、KpnI、EcoRV、NotI、SphI、NcoI、XhoI、SmaI、PacI、NheI、BamHI、PmeI或者SalI。

4.根据权利要求1所述的重组单纯疱疹病毒遗传操作系统，其特征在于，所述的原核抗性基因是氯霉素抗性基因或者四环素抗性基因。

5.根据权利要求1所述的重组单纯疱疹病毒遗传操作系统，其特征在于，所述的真核抗性基因是卡那霉素抗性基因、潮霉素抗性基因、新霉素抗性基因或者吉欧霉素抗性基因中的一种或者几种。

6.根据权利要求1所述的重组单纯疱疹病毒遗传操作系统，其特征在于，该重组单纯疱疹病毒遗传操作系统还包括重组酶。

7.根据权利要求6所述的重组单纯疱疹病毒遗传操作系统，其特征在于，所述的重组酶是Cre酶、FRT酶、C31或者BTl整合酶。

8.根据权利要求1所述的重组单纯疱疹病毒遗传操作系统的制备方法，其特征在于，首先，构建同源重组前体质粒，该质粒包含多克隆位点MCS、荧光蛋白基因、真核抗性基因以及原核抗性基因，在MCS和真核抗性基因的外侧融入位点特异性重组酶系统识别序列；其次，同源重组前体质粒pRKBAC-MCS中插入了HSV基因组的两条同源臂DNA；再次，构建穿梭质粒，在细菌克隆载体的多克隆位点MCS2外侧融入位点特异性重组酶系统识别序列。

9.权利要求1所述的重组单纯疱疹病毒遗传操作系统在构建复制缺陷型的重组单纯疱疹病毒中的应用。

10.权利要求1所述的重组单纯疱疹病毒遗传操作系统在构建选择复制型的溶瘤单纯疱疹病毒中的应用。