[发明专利]一种生产高纯度果糖的酿酒酵母系统

权利要求书

1.一种生产高纯度果糖的酿酒酵母系统，其特征在于，该系统包括酿酒酵母菌株、菊粉酶基因表达盒、HXK1基因敲除盒DNA片段、HXK2基因敲除盒DNA片段和由酵母终止子、酿酒酵母2μ质粒完整序列、酵母营养缺陷筛选基因、酵母启动子序列依次连接构成的酵母-大肠杆菌穿梭质粒的酵母载体部分。

2.如权利要求1所述的酿酒酵母系统，其特征在于，所述的酵母启动子是酵母菊粉酶基因启动子、TEF1基因启动子、ADH1基因启动子、ADH2基因启动子、GAPDH基因启动子、GAL1基因启动子、GAL10基因启动子中的任意一种，或者其中两种及两种以上启动子的融合启动子。

3.如权利要求1所述的酿酒酵母系统，其特征在于，所述的酵母终止子是菊粉酶基因终止子、CYC1基因终止子、TEF1基因终止子、ADH1基因终止子中的一种或者几种。

4.如权利要求1所述的酿酒酵母系统，其特征在于，所述的酵母营养缺陷筛选基因是LEU2、ADE2、URA3、TRP1或者HIS3中的一种或者几种。

5.一种利用权利要求1所述的酿酒酵母系统生产果糖的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

(1)酵母-大肠杆菌穿梭质粒的酵母载体部分与菊粉酶基因表达盒共转染酿酒酵母菌株，获得菊粉酶表达重组酿酒酵母工程菌；

(2)将HXK1基因敲除盒DNA片段、HXK2基因敲除盒DNA片段先后转化菊粉酶表达重组酿酒酵母工程菌，获得酿酒酵母HXK1和HXK2基因双缺失突变工程菌；

(3)将酿酒酵母HXK1和HXK2基因双缺失突变工程菌接种于培养基，制备种子液，发酵，获得果糖。

6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述步骤3以菊芋为原料生产果糖。

7.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，制备种子液的培养基是选择性培养基或菊芋培养基。

8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，菊芋培养基糖浓度2-20％w/v。

9.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，发酵培养基糖浓度2-20％w/v。

10.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，制备种子液的温度为28℃-32℃，时间为12h-120h。