[发明专利]一种抑制转录因子Sp1基因表达的siRNA及其用途

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，特别涉及一种抑制转录因子Sp1基因表达的siRNA，siRNA的核苷酸序列及含有siRNA的重组载体，以及它们的用途。

背景技术

转录因子Sp1(Specificity protein 1)是一种DNA结合蛋白，是第一种被克隆和纯化的转录因子，属于Sp/Kǘppel样转录因子家族，其主要特征是含有高度保守的DNA结合区。它由3个保守的Cys2His2锌指结构相互特异结合而形成，锌指之间可能参与蛋白之间的相互作用。通常认为Sp1以细胞和启动子的特异性方式调控GC伏击区启动子的基因表达，虽然Sp1自发现以来就被认为是一种基础的转录因子，但越来越多的证据表明它是控制细胞功能的上游基因，受Sp1调节的下游基因众多，它广泛的参与和调节一系列的生物功能，包括细胞生长、分化和肿瘤的发展与演进等。

由于通过抑制上游因子的表达可以抑制下游多种基因的表达。因此，针对上游转录因子的靶向治疗已成为研究的热点。肿瘤分子靶向治疗的特点是高效、特异、安全。但是肿瘤基因靶向治疗面临的最大问题是缺乏肿瘤高特异性的相关基因和无毒、高效的基因治疗载体。

小分子干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)具有严格的序列特异性、高效性和生物遗传性，可以特异、高效地阻断体内同源基因表达，促使同源mRNA降解，诱使细胞表现出特定基因缺失的表型，称为RNA干扰(RNA interference，RNAi)。自RNAi现象发现后，因其操作简单、特异性高、能迅速而方便地使某个基因失去功能等特点，获得了生物学家的青睐而首先被应用于功能基因组和反向遗传学的研究。

发明内容

因此，本发明要解决的技术问题就是针对缺乏转录因子Sp1基因的特异性抑制剂的不足，提供一种抑制转录因子Sp1基因表达的siRNA及抑制所用的重组载体和方法，所述的siRNA特异性地在mRNA水平靶向Sp1基因，有效抑制Sp1表达，使肿瘤细胞增殖减慢，瘤体生长受到明显抑制。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案之一是：一种抑制转录因子Sp1基因表达的siRNA，所述的siRNA对应的靶序列是人转录因子Sp1基因编码区的mRNA，所述的siRNA的长度为16～30bp。所述的siRNA的长度较佳的为18～25bp。更佳的，所述的siRNA是由下述核苷酸序列序列的任意一种或几种：

A：5’-GGTGCAAACCAACAGATTA-3’

3’-CCACGTTTGGTTGTCTAAT-5’

B：5’-CCAACAGATTATCACAAAT-3’

3’-GGTTGTCTAATAGTGTTTA-5’

C：5’-GGAAGTGGAGGCAACATCA-3’

3’-CCTTCACCTCCGTTGTAGT-5’

A由SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2组成，B由SEQ ID NO.3和SEQ IDNO.4组成，C由SEQ ID NO.5由SEQ ID NO.6组成。siRNA的核苷酸序列由正义链和反义链组成，SEQ ID NO.1是正义链，SEQ ID NO.2是反义链，SEQ ID NO.3是正义链，SEQ ID NO.4是反义链，SEQ ID NO.5是正义链，SEQ ID NO.6是反义链。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案之二是：一种重组载体，其含有如上所述的编码抑制转录因子Sp1基因表达的siRNA。

根据本发明，所述的重组载体所用的载体可以是本领域常规的载体，包括各种质粒，本发明优选pGCsi3.0GFP质粒。将所述siRNA片段连接到载体如pGCsi3.0GFP质粒中，即得本发明的重组载体。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案之三是：一种转录因子Sp1基因沉默的细胞，含有如上所述的重组载体。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案之四是：一种如上所述的转录因子Sp1基因沉默的细胞的制备方法，包括将如上所述的的重组载体转化或转染宿主细胞。转化或转染的方法可以是本领域常规的方法，优选脂质体转染法。

本发明中，所述的重组载体含有编码抑制Sp1基因表达的siRNA，转化或转染宿主细胞后，转录出siRNA，降解Sp1的mRNA，使宿主细胞内源的Sp1基因沉默。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案之五是：一种如上所述的siRNA的用途，用于制备转录因子Sp1抑制剂，或者用于制备治疗或预防转录因子Sp1相关疾病的药物组合物，如治疗或抑制肿瘤的药物、肝癌靶向药物等。