[发明专利]甲胎蛋白化学发光定量检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于体外临床检验和化学发光免疫检测领域，尤其涉及一种用于定量检测肿瘤指标甲胎蛋白(AFP)的试剂盒。

背景技术

甲胎蛋白(α-Fetoprotein，AFP)是单一多聚体肽键糖蛋白，含590个氨基酸，分子量约为70KD，与血清白蛋白、维生素结合蛋白属同一基因家族。AFP主要在胎肝合成，其次是卵黄囊、胃肠道粘膜，肾脏也少量合成。AFP于胎儿6周开始合成，12-15周达到高峰。出生后1-2年降至成人水平。

AFP是诊断肝癌灵敏度高和特异性好的肿瘤标志物，是临床诊断原发性肝细胞癌的主要实验室指标，常用于原发性肝癌临床检查及普查。大部分肝癌患者呈持续性高水平升高，部分患者呈低水平增高。AFP的含量与肿瘤的大小、癌细胞的分化程度有一定的关系，其动态变化可用于观察病情进展状态，因而AFP对肝癌有早期诊断价值。检测肝癌患者血清AFP还可作为治疗效果的评价指标。一般急性肝病，可随病情好转AFP含量下降或正常，肝硬化可呈下降或持续低水平，肝癌则逐渐上升。另外，AFP阳性不是肝癌所独有的，其他组织的一些肿瘤，如胃癌、畸胎瘤、胰腺癌、结肠癌等以及妊娠期，甲胎蛋白也可升高。病毒性肝炎、肝硬变时甲胎蛋白也可见到阳性结果。

与目前常用的酶联免疫(ELISA)检测方法相比，化学发光免疫分析既具有放射免疫的高灵敏度，又具有酶联免疫的操作简便、快速的特点，易于标准化操作。检测过程中不使用有害的试剂，试剂保持期长，成为非放射性免疫分析法中最有前途的方法之一。在化学发光免疫分析中包含两个部分，即免疫反应系统和化学发光系统。免疫反应系统的基本原理是ELISA。抗原或抗体结合到某种固相载体表面，待测样品中的抗体或抗原按一定程序与结合到固相载体上的抗原或抗体反应形成抗原-抗体复合物。再加入酶标的抗原或抗体与其反应，底物在酶的催化下变成有色产物，通过分析有色产物检测待测样本中物质。化学发光系统的原理在于免疫反应中的酶作用于发光底物。发光底物在酶的作用下，底物发生化学反应并释放出大量的能量，产生激发态的中间体。这种激发态中间体，当其回到稳定的基态时，可同时发射出光子。利用发光信号测量仪器即可测量光量子产额，该光量子产额与样品中的待测物质的量成正比。由此可以建立标准曲线并计算样品中待测物质的含量。

发明内容

为快速、高效的定性、定量检测肿瘤标志物AFP，本发明提供一种用于定性、定量检测肿瘤标志物AFP的化学发光免疫分析定量检测试剂盒。

本发明的技术方案如下：

一种甲胎蛋白化学发光定量检测试剂盒，包括反应板，酶结合物，发光底物，校准品，质控品，浓缩洗涤液，所述的反应板包被有抗甲胎蛋白抗体。

所述的校准品以甲胎蛋白纯品配制，浓度为0，20，50，100，250，500ng/ml。

所述的质控品以甲胎蛋白纯品配制，由质控品I和质控品II两部分组成，质控品I的浓度为3-95ng/ml，质控品II的浓度为105-490ng/ml。

所述的质控品I的浓度优选为50ng/ml，质控品II的浓度优选为250ng/ml。

所述的酶结合物为HRP标记的抗甲胎蛋白抗体，所述的反应板材质是不透明的聚苯乙烯或聚乙烯，所述的发光底物为鲁米诺、异鲁米诺或其衍生物，所述的浓缩洗涤液是pH7.0-pH8.0的中性缓冲液。

本发明提供的甲胎蛋白(AFP)化学发光定量检测试剂盒具有以下优越性：

1.本发明可定性、定量的检测病人甲胎蛋白的含量，并通过甲胎蛋白的含量多少诊断病情，判断病人病情发展、变化。

2.本发明采用化学发光免疫分析技术，既保留了酶联免疫的操作简便、快速的特点，又具有放射免疫的高灵敏度，易于标准化操作，适合在医院普及、推广使用。

3.本发明通过检测发光信号值分析显色底物，大大提高了检测的灵敏性，与ELISA法相比，其分析灵敏度大幅度提高。

4.试剂盒制作工艺简单，操作安全，检测所需样本量少、时间短，实用性强。

附图说明

图1 AFP化学发光定量检测试剂盒临界值的确定。

图2甲胎蛋白化学发光定量检测试剂盒与Roche试剂盒相关性的比较。

具体实施方式

实施例1：制备本发明的甲胎蛋白化学发光定量检测试剂盒

1.固相包被板的制备