[发明专利]散发性乳腺癌用药指导遗传检测

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学和医学领域，更具体的，本发明涉及一种散发性乳腺癌用药指导遗传检测的试剂盒。

背景技术

乳腺癌是乳腺导管上皮细胞在各种内外致癌因素的作用下，细胞失去正常特性而异常增生，以致超过自我修复的限度而发生癌变的疾病，临床以乳腺肿块为主要表现。乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，有发病率高、具侵袭性、但病程进展缓慢、自然生存期长等特点。

乳腺癌是主要危害妇女身体健康的疾病，男性也可患乳腺癌，但男性患乳腺癌的机会比女性要少100倍。乳腺癌的好发部位以乳房外上占多数。早期乳腺癌可无任何自觉症状，病变晚期可出现乳腺肿块，质地硬韧，边界不甚清晰，无包膜感，推之移动性小，多数无明显疼痛，乳头出现回缩、偏位，乳头溢流黄水或血水，癌性湿疹样改变。

乳腺癌的主要发生机制是雌激素促进乳腺和子宫内膜等增生的机制，除诱导多种生长因子表达增高外，还影响细胞周期蛋白cyclin D1，从而加速细胞分裂增殖，诱发肿瘤。细胞周期蛋白(cyclins)作为细胞周期的正调控因子，使细胞由G1期越过S期，这种作用尤以cyclin D1明显。Cyclin D1是细胞周期蛋白成分中被证实与肿瘤有最直接关系的癌基因。其过量表达可导致G1期缩短，细胞分裂速度加快，在肿瘤的发生机制中有重要意义。E2诱导的cyclin D1表达中有多个启动子元件，其近端区域GC丰富区有结合SP1的位点。在基因组模式下，E2活化的核内ER-α与cyclin D1的SP1相互作用，促进了cyclin D1的转录。而在非基因组模式下，雌激素介导的Src/PI3K[60]和cAMP/PKA通路的快速活化也可以增强cyclin D1的转录和表达。

乳腺癌分为家族性乳腺癌和散发性乳腺癌，散发性乳腺癌目前主要通过激素药物进行治疗。

发明内容

本发明提供一种散发性乳腺癌用药指导遗传检测试剂盒。

该试剂盒包括：检测激素药物用药靶向位点COMT基因Val158Met位点、GSTT1基因Present/Null位点多态性的特异性引物对及特异性荧光探针对、Taq酶、dNTP混合液、MgCl2溶液、反应缓冲液、去离子水。

本试剂盒中所述的特异性荧光探针对对于本领域普通技术人员来说是能够轻易完成设计的，特异性荧光探针对可用常规的探针合成技术进行合成。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照厂商所建议的条件。

实施例  检测试剂盒的使用

步骤1：DNA模板的抽取

用硅胶吸附法抽提口腔上皮细胞的基因组DNA。

步骤2：荧光定量PCR反应

使用检测试剂盒中的荧光定量PCR套装，进行荧光定量PCR反应，反应的体系为总体积10μl，包含浓度为20ng/μl的DNA模板2μl、1μl 10X荧光定量PCR反应缓冲液、0.1μl 25mM dNTP混合液、0.6μl 25mMMgCl₂溶液、0.025μl(5units/μl)Taq DNA聚合酶、20μM的有义引物和反义引物各0.225μl、10μM的带VIC荧光探针和带FAM荧光探针各0.25μl，去离子水5.325μl。

在PCR扩增仪上进行反应，反应条件为50℃、2分钟，95℃、10分钟，进行60个循环的95℃、30秒，60℃、1分钟。反应结束后在荧光定量PCR仪上读取样品荧光量。

步骤3：基因型分析

根据试剂盒使用说明书标示的基因分型图示对SNP位点进行基因型分析。

熟悉荧光定量PCR技术的本领域技术人员能够通过辨识荧光定量PCR仪上显示的最终样品荧光量，根据不同序列探针荧光信号的强弱即可确定所检测的SNP位点的基因型。