[发明专利]玉米秆碳源培养彩绒革盖菌诱导草酸脱羧酶的方法

权利要求书

1.一种玉米秆碳源培养彩绒革盖菌诱导草酸脱羧酶的方法，包括：

(1)将粉碎的玉米秆按照固液比为1g∶5-15ml的比例用酸溶液浸泡10-20h，在100-150 ℃条件下水解反应20-60min，离心去除残渣后，得到玉米秆水解液，并用DNS法测定水解 液中还原糖含量；

(2)按7-30g/L的还原糖量，将玉米秆水解液配制发酵培养基，调节pH值为4.0-5.0， 过滤除去杂质，并添加氮源和无机盐获得发酵培养基，再检查并调节pH值至4.0-5.0，灭菌 后备用；其中，

发酵培养基中组分为：玉米秆水解物中的还原糖7-30g，蛋白胨3.0g，KH₂PO₄1.0g， Na₂HPO₄·12H₂O 0.2g，MgSO₄·7H₂O 0.5g以及微量元素1ml，用水定容至1L；

微量元素的组分为：FeSO₄·7H₂O 10g，MnSO₄·H₂O 1.0g，ZnSO₄·7H₂O 1.0g，CuSO₄·5H₂O 2.0g，CaCl₂·2H₂O 13g，用水定容至1L；

(3)取2-3片直径为9～11mm含菌丝体的琼脂培养基，接入液体种子培养基，在30℃静 置培养4-6天；待菌丝体在液体培养基上方形成白色菌丝群但尚未浮出水面时，将菌丝体和 培养基全部转移到含有无菌玻璃珠的容器中，对菌丝体进行震荡破碎获得含有菌丝碎片的悬 浊液，以3-15％的接种量接入发酵培养基，在20-30℃和100-250rpm转速条件下培养4-6天；

(4)待菌丝球形成时，加入终浓度为5-20mM的草酸诱导草酸脱羧酶的产生，培养0.5-6 天后获取菌丝体；菌丝体经液氮冷冻后研磨破碎，用0.2M，pH 3.7的醋酸缓冲液提取菌丝 碎片，离心去除残渣，所得上清液即为草酸脱羧酶粗酶液。

2.根据权利要求1所述的一种玉米秆碳源培养彩绒革盖菌诱导草酸脱羧酶的方法，其特征在 于：所述步骤(1)中的酸为硫酸、盐酸或醋酸，质量百分比浓度为0.5％-8％。

3.根据权利要求1所述的一种玉米秆碳源培养彩绒革盖菌诱导草酸脱羧酶的方法，其特征在 于：所述步骤(2)用氢氧化钠溶液调节pH值。

4.根据权利要求1所述的一种玉米秆碳源培养彩绒革盖菌诱导草酸脱羧酶的方法，其特征在 于：所述步骤(3)中的液体种子培养基，以葡萄糖代替发酵培养基中的还原糖，其余组分与 发酵培养基相同。