[发明专利]耐受性肿瘤细胞抗原负载树突状细胞,其制法以及应用

说明书

技术领域

本发明涉及树突状细胞及其制备方法、该树突状细胞在制备抗癌症药物中 的应用、制备该树突状细胞的疫苗。特别地，本发明涉及耐受性肿瘤细胞的制 备方法和应用，以及其抗原负载的树突状细胞及其制备方法、该耐受性肿瘤细 胞抗原负载的树突状细胞在制备抗癌症药物中的应用、制备该耐受性肿瘤细胞 抗原负载的树突状细胞的疫苗。

背景技术

目前癌症的治疗方法包括手术治疗、放射治疗和化疗。但现有的癌症治疗 方法不能根治癌症。主要原因是构成癌症的细胞中含耐受性肿瘤细胞，其具有 细胞耐受性的生物学特性，例如对化疗药物的高耐药性及对放射治疗的高耐辐 射性，极少数的肿瘤细胞还驱动肿瘤血管生成拟态的形成。因此耐受性肿瘤细 胞是癌症发生和发展(癌症的生长、癌症产生耐受性、癌症复发和转移等)的 真正元凶。

现有技术已尝试使用树突状细胞免疫治疗方法来治疗癌症，即从患者癌症 中将肿瘤细胞分离出来，通过裂解该肿瘤细胞得到抗原，并将该抗原负载到患 者的树突状细胞上。如此得到的靶向肿瘤细胞的树突状细胞，可以用于治疗癌 症。例如：CN1686538A和CN1705489A中公开了将肿瘤细胞制备得到的抗原 负载到树突状细胞上，并用所得树突状细胞治疗癌症的方法。

现有技术仅公开了如何得到相关肿瘤细胞，但并未教导对获取的肿瘤细胞 进行处理。并且，现有技术的上述方法虽然以肿瘤细胞为靶标，但是该方法仍 然存在癌症在放疗和化疗后耐药性、复发率和转移率高的问题。

发明内容

为了克服现有以普通肿瘤细胞为靶标的癌症免疫治疗方法仍然存在癌症 在放疗和化疗后耐药、复发和转移的问题，本发明的目的是提供一种耐受性肿 瘤细胞抗原负载的树突状细胞及其制备方法、该耐受性肿瘤细胞抗原负载的树 突状细胞在制备抗癌症药物中的应用、制备该耐受性肿瘤细胞抗原负载的树突 状细胞的疫苗。

现有技术认为经射线照射和/或与大剂量化疗药物接触后，肿瘤细胞会被 全部杀死，但是本发明的发明人意外地发现，在一定范围内经射线照射和/或 与大剂量化疗药物接触后，肿瘤细胞不但不会被完全杀死，而且还会产生具有 很强耐受性的肿瘤细胞。一般剂量的射线照射和/或化疗药物很难杀灭所述耐 受性肿瘤细胞。

本发明提供了一种耐受性肿瘤细胞抗原负载的树突状细胞的制备方法，该 方法包括：通过裂解耐受性肿瘤细胞得到肿瘤细胞抗原组合物，将树突状细胞 与耐受性肿瘤细胞抗原组合物接触得到负载肿瘤抗原的抗癌树突状细胞，其 中，所述耐受性肿瘤细胞通过以下方法制备，该方法包括：

对肿瘤细胞进行射线照射和/或化疗药物筛选的步骤，

所述射线照射筛选通过将肿瘤细胞暴露于射线的照射源下完成，所述射线 选自由α射线、β射线、X射线和γ射线所组成的组中，

所述化疗药物筛选通过使肿瘤细胞与化疗药物接触完成，所述化疗药物由 选自烷化剂化疗药物、亚硝脲化疗药物、抗代谢化疗药物、抗生素化疗药物、 植物化疗药物、激素及内分泌药物化疗药物、抗体阻断剂化疗药物、植物化疗 药物、抗体阻断剂化疗药物、羟基脲、卡铂、草酸铂、顺铂、丙亚胺门冬酰胺 酶和氮烯咪胺所组成的组中。

本发明还提供了由上述的方法得到的耐受性肿瘤细胞抗原负载的树突状 细胞。

本发明还提供了一种耐受性肿瘤细胞抗原负载的树突状细胞疫苗，所述树 突状细胞疫苗包括树突状细胞，其特征在于，所述树突状细胞为本发明所述的 耐受性肿瘤细胞抗原负载的树突状细胞。

本发明还提供了本发明的耐受性肿瘤细胞抗原负载的树突状细胞疫苗在 制备抗癌症药物中的应用。

由于本发明的肿瘤细胞经过了射线照射和/或化疗药物的筛选，由此得到 的肿瘤细胞产生了与肿瘤细胞不同的变化(比如特异表达了许多不同于肿瘤细 胞的蛋白)，更接近接受过放疗和/或化疗的癌症内的肿瘤细胞，因此，由本发 明提供的耐受性肿瘤细胞以及由该耐受性肿瘤细胞得到的抗原组合物制备的 药物，能够在体内和体外杀死引起癌症复发的肿瘤细胞，从而为癌症的根治提 供了可能。

附图说明

图1为制备例4的胃瘤细胞经γ射线辐射筛选后的存活率曲线；

图2为制备例2的肾细胞瘤细胞经γ射线辐射筛选后的存活率曲线；

图3为重复制备例4的胃癌细胞经9Gy的γ射线辐射筛选后的存活率曲 线；