[发明专利]一种血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)匀相法体外诊断试剂

说明书

技术领域

本发明涉及血清低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)匀相法体外诊断试剂，可广泛应用在医学及生物化学技术领域。

背景技术

LDL-C是血浆中胆固醇含量最多的一种脂蛋白，颗粒较小，其胆固醇的含量(包括胆固醇酯和游离胆固醇)在一半以上。LDL-C的主要生理功能是将肝脏内的胆固醇经血液转运到各个组织进行利用，促进细胞内胆固醇的大量蓄积。众多的流行病学研究表明，血清LDL-C与动脉粥样硬化(AS)、冠心病(CHD)呈正相关。

临床上测定LDL-C的方法有超速离心沉淀法、Friedewald公式法、各种电泳法和美国NCEP推荐的参考方法即Beta-quantification法，简称βQ法，还有Mcnamara等报道的DirectLDL法，沉淀法和电泳法麻烦、费时，计算法受很多因素影响，βQ法准确度欠佳，DirectLDL法尽管称为直接测定法，但仍需聚苯乙烯胶乳免疫分离预处理，属于不均一相测定法(heterogeneousassay)。

应用于全自动生化分析仪的血清低密度脂蛋白胆固醇匀相测定方法已有报道，张世俊等(中华检验医学杂志，2000，23(5)：276-299.)、日本第一化学药品株式会社(专利号：71950.28)、化生研株式会社(专利号：7182112.7)均开展了LDL-C清除法方法学研究，这些方法首先用磷钨酸根、或单一表面活性剂、或磷钨酸根与单一表面活性剂的组合与血清LDL-C形成复合物，同时将血清中非LDL-C脂蛋白组分进行裂解并最终用过氧化氢酶(CAT)清除生成的H₂O₂，然后加入表面活性剂将LDL-C组分裂解并显色，最后进行可见光比色定量。这些方法的缺点是检测时依赖全自动生化分析仪，不仅测试灵敏度低，而且为满足全自动生化分析仪参数设置的要求，即使采用仪器所允许的最小标本取用量，对测定体系而言仍存在标本取用量过大、与LDL-C共存的干扰物质过多的问题，此外磷钨酸根、或单一表面活性剂、或磷钨酸根与单一表面活性剂的组合与LDL-C形成的复合物在清除血清非LDL-C过程中有分解的趋势，从而不能完全排除血清中非LDL-C组分的干扰。

化学发光分析法是借助化学发光现象而建立起来的一种分析方法，此方法不需要复杂的仪器，不需要光源(从而减少或消除瑞利散射和拉曼散射)和色散装置，没有可见光比色定量分析方法中常见的散射光和杂散光的干扰，大大提高了信噪比，因而具有灵敏度高、线性范围宽的优点，近年来已被广泛应用于生命科学、临床医学、环境检测、食品分析以及农业分析等各个领域，但尚未应用于血清LDL-C的定量分析。应用于全自动生化分析仪的LDL-C定量分析方法由于缓冲体系缓冲容量及pH值的差异、测定试剂中含过氧化氢酶、叠氮钠等抑制化学发光的物质而无法应用于LDL-C化学发光定量检测试剂的建立。

发明内容

本发明的目的是提供一种化学发光法定量检测血清LDL-C的测定试剂，以克服现有测定方法及试剂存在的缺点。该测定试剂置2-8℃保存可至少可稳定12个月，提供的试剂可以应用于目前广泛使用的微孔板化学发光仪，从而达到大规模测定样本的要求。

该测定试剂的特征是：第一步，采用一组由三甲基-β-环糊精、环氧乙烷十八烷胺、泊洛沙姆F88、布里杰-58组成的表面活性剂选择性裂解血清中乳糜颗粒(CM)、极低密度脂蛋白胆固醇(VLDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)，并在胆固醇酯酶(COE)和胆固醇氧化酶(COD)的催化反应下生成H₂O₂，利用过氧化氢化学发光清除体系分解H₂O₂，此时血清中LDL-C颗粒仍保持完整；第二步，在TritonX-100作用下，COE和COD催化LDL-C反应生成H₂O₂，H₂O₂在POD催化下促使化学发光定量体系产生化学发光，在微孔板化学发光仪上测量发光强度后对LDL-C进行定量。依以下公式计算血清中LDL-C含量，计算公式为：血清LDL-C(mmol/L)＝ΔI_血清/ΔI_校准液×校准液浓度，其中为ΔI_血清待测血清化学发光强度，ΔI_校准液为LDL-C校准液化学发光强度。