[发明专利]抗人CD20人源化抗体、其制备方法及用途

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种抗体、其制备方法和用途。

背景技术

非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)是最常见的淋巴系统恶性肿瘤，好发于青壮年，其中绝大多数为B细胞来源，约占85％。在未治疗状态下，低度和部分中度恶性NHL如小淋巴细胞性淋巴瘤和滤泡型淋巴瘤的生长形式往往呈惰性过程，中位生存期为5～9年。它们对首次化疗敏感，但很容易复发或耐药，当再次化疗或放疗时，疗效明显降低，因而被认为是难以治愈的恶性肿瘤。而一些高度恶性的NHL则死亡率极高。

近年来，针对细胞表面分子的抗原靶向性治疗已取得了巨大进展并成为一种非常有发展前途的治疗方法，其中被广泛使用且富有成效的是抗CD20的单抗制剂[Maloney DG.Immunotherapy for non-Hodgkin′s lymphoma：monoclonal antibody and vaccines.J Clin Oncol.2005Sep 10；23(26)：6421-6428]。

CD20抗原是非结合性单抗疗法的一个理想靶点，因为该抗原具有克隆特异性，仅表达于所有的前B细胞和成熟B细胞，而不表达于造血干细胞、浆细胞和其他造血细胞系；同时，CD20分子在B淋巴瘤细胞表面的表达量异常增高，磷酸化增加，与B细胞淋巴瘤的发生密切相关。CD20分子在超过95％的B细胞性NHL中均有表达，且抗原分子在膜上比较暴露，容易接近，与单抗结合后无显著内化和脱落，也不会因与抗体的结合而发生抗原调变，因此成为治疗B细胞淋巴瘤的理想靶点。

CD20单抗疗法在治疗B细胞淋巴瘤中已取得了令人满意的效果，目前抗CD20抗体主要有以下几种，按照其发挥抗肿瘤作用的不同功能分为两大类：(1)主要通过CDC、ADCC(CDCC)作用发挥功能的：C2B8、1F5、2H7、2F2(2)主要通过凋亡、ADCC(CDCC)作用发挥功能的：B1、11B8。美国IDEC医药公司针对B细胞淋巴瘤生产的人鼠嵌合抗CD20单克隆抗体Rituximab-C2B8是第一个经美国FDA批准用于治疗淋巴瘤的抗体。1997年批准上市。美罗华是一种嵌合型IgG1免疫球蛋白，它是通过转染相关基因结构到仓鼠卵细胞后表达的基因产物。美罗华含1328个氨基酸，分子量约144KD，由鼠抗CD20单克隆抗体的可变区Fab和人IgG1抗体稳定区Fc片段构成。

杂交瘤技术生产的鼠源单克隆抗体进入人体后可能引起人抗鼠抗体免疫应答human antimouse antibody response(HAMA)[Winter G，Harris WJ.Humanized antibodies.Immunol Today.1993 Jun；14(6)：243-6]。因此，如何通过基因工程技术来构建抗降低鼠源抗体的免疫原性的抗体，有效地减少HAMA反应的发生率是本领域的技术人员急于解决的问题。