[发明专利]用于循环性巨噬细胞的性质确定和/或分类的方法以及施行该方法的分析安排

说明书

本分案申请是基于申请号为03816702.6，申请日为2003年6月2日，发明名称为“用于循环性巨噬细胞的性质确定和/或分类的方法以及施行该方法的分析安排”的原始中国专利申请的分案申请。

本发明涉及通过非细胞自身抗原的用于循环性巨噬细胞的性质确定和/或分类的方法，以及施行这样的方法的分析安排。

从Sinha，Wilson，Gleason：Immunoelectron microscopiclocation of prostatic-specific antigen in human prostate by theprotein A-gold complex，Cancer，1987，60，1288-91中已知，来自前列腺组织的细胞的电子显微镜检查的实施，其中根据所引用的文献将前列腺的正常组织、前列腺癌组织和前列腺增生组织与金标记的PSA抗体进行温育。检查表明金颗粒存在于细胞质、细胞内颗粒、RES和溶酶体中。随着增加的肿瘤的终末分化，更多的金颗粒出现在膜结构中。这认为是下列情况的标志，即PSA(前列腺特异性抗原)随着增加的肿瘤细胞的终末分化而存留于膜结构中。该检查的另一个方面为在粒细胞和巨噬细胞中同样检测出金颗粒。

在流式细胞计量术检查中，在循环血中发现PSA阳性的细胞。但是在之前已知的检查中，只有巨噬细胞的表面因PSA而被染上颜色。

在巨噬细胞中没有发现PSA分子的mRNA这一事实导致这样的单一结论，即只吸收了PSA分子，而不涉及消除微转移。参见Brandt，Griwatz，Brinkmann：Circulating prostate-specific antigen/CD14-double-positive cells；abiomarker indicating low risk for hematogeneousmetastasis of prostate cancer，J.Natl.Cancer Inst.1997；89，174。

众所周知，聚集在较有序或较无序的细胞群中的组织组成细胞的恶性变化称为肿瘤。这些肿瘤细胞无视组织的排列，无限制地生长，和通过大小的增加以及浸润入其他的周围组织、器官中而扩张，或者跨越组织界限而进入血管系统或淋巴系统中。

一旦肿瘤到达血管系统或淋巴系统，那么此处的单个细胞或细胞群会通过这些系统游离开，并作为子肿瘤即转移灶而在身体的其他部位附着。在此存在这样的危险，即转移灶继续生长并掠夺身体的能量，直至身体衰亡和被其疾病所击倒。

在这种肿瘤的形成期间，肿瘤细胞产生用于促进其生长的物质。另外，可作为肿瘤生长指示物的物质可被释放出来。后者称为肿瘤标记。但是这些标记对于肿瘤不是特异的，而只有血液中所测量的浓度的数量，因为健康的细胞也能够释放这些物质。因此，肿瘤标记不能用于检测肿瘤，而只能用于疾病或治疗过程的监测。肿瘤的一个特殊标记为前列腺特异性抗原(PSA)，从血液中的一定浓度开始其就表明有前列腺癌。但是，前列腺的良性增大也可以引起血液中PSA值的升高。

迄今，肿瘤疾病主要通过给出图像的方法来诊断，例如超声波或计算机断层摄影术、乳腺造影法等等。可是，只有根据含有肿瘤的组织样品才能作出最终的确定，并确定治疗过程。

肿瘤疾病引起人体自身的免疫系统的对抗。这种免疫系统由一系列执行不同任务的不同细胞类型组成。其中，巨噬细胞具有这样的任务，即识别某些病样物质，吞噬之，并将其分解成其组分。随后，将被吞噬的细胞的片段呈递在其他免疫细胞的表面上，因此这使得能够识别应当进攻的结构。

存在迫切的需求以在早期阶段施行循环性巨噬细胞的性质确定，而无须进行人体的直接检查。

本发明的任务在于提供使得能够施行循环性巨噬细胞(PBMC)的性质确定和/或分类的方法以及分析安排。

根据本发明，由于能够在循环性巨噬细胞中检测被吞噬的肿瘤细胞的抗原或片段，因此能够施行直接和特异的肿瘤检测。

根据本发明，抽取全血样品，随后进行梯度离心以分离巨噬细胞。然后将巨噬细胞穿孔，并施行使用至少一种经挑选的抗体的细胞内染色。

随后，使用本身已知的流式细胞计量术以在单一水平上记录细胞性质。

流式细胞计量术使得能够在液体流中进行细胞计数和分析细胞的物理和分子性质。具体地而言，借助于荧光染料标记的试样如抗体而在单一水平上测定细胞或细胞群体的性质并记录。