[发明专利]用于随后通过基于核酸的传感器检测的衍生分析物方法

权利要求书

1.衍生分析物用于随后通过传感器对所述分析物进行检测的方法，所述传感器基于核酸对所述衍生分析物的特异性识别，所述方法包括：

-以任何顺序提供，具有第一官能团的分析物，以及具有第二官能团的衍生试剂，其中所述第一和第二官能团能够相互反应以在所述分析物和衍生试剂之间形成键，所述衍生试剂进一步具有允许在所述衍生试剂和所述核酸之间进行碱基堆积或形成氢键的取代基，

-使所述衍生试剂和所述分析物进行反应以生成衍生分析物。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述分析物是分子量在1-500Da范围内，优选在10-300Da范围内，更加优选在50-250Da范围内的分子。

3.根据权利要求1-2中任一项所述方法，其中所述第一官能团选自苯基、醇、酮、醛、羧酸、羧酸酯、醚、环氧化物、硫醇、胺、酰胺和卤化物。

4.根据权利要求1-3中任一项所述方法，其中所述第二官能团选自醛、异硫氰酸酯、活化酯、马来酰亚胺、碘乙酰胺、苯汞基团、三嗪、肼、羟胺和二醛。

5.根据权利要求1-4中任一项所述方法，其中所述取代基选自吡啶，嘌呤，芳香胺，酰胺，羧酸，含有色氨酸、酪氨酸和/或苯丙氨酸的多肽。

6.根据前述任一项权利要求所述的方法，其中所述衍生分析物的分子量在50-10,000Da范围内，优选在100-5000Da范围内，更加优选在250-2000Da范围内。

7.根据前述任一项权利要求所述的方法，其进一步包括通过传感器检测所述衍生分析物的步骤，其中所述传感器基于核酸对所述衍生分析物的特异性识别。

8.根据前述任一项权利要求所述的方法，其进一步包括在检测前对所述衍生分析物进行排阻过程，从而将分子量＞10,000Da的分子从所述衍生分析物中分离的步骤，优选利用半透膜，其中所述半透膜仅允许分子量＜10,000Da的分子从所述膜的第一侧穿过到与所述第一侧相对的所述膜的第二侧。

9.用于检测分析物的传感器，所述分析物优选为根据权利要求1-8中任一项所述的方法制备的衍生分析物，所述传感器是基于核酸对所述分析物的特异性识别，所述传感器包含检测室，该检测室包括：

a)第一核酸，其能够特异性识别并结合分析物，例如衍生分析物，所述第一核酸包括

-可激活的酶结构域，所述酶结构域处于活化状态，具有对核酸的位点特异性切割活性，

-能够特异性识别并结合分析物的分析物结合结构域，

-连接所述可激活的酶结构域和所述分析物结合结构域的通信结构域，其中所述可激活的酶结构域在所述分析物结合到所述分析物结合结构域上后，被由非活化状态激活为活化状态，

b)一套可连接到电源上的至少第一和第二电极，

c)第二核酸，其具有部分双链结构而且包括能够结合所述第二核酸的嵌入性氧化还原活性的化合物，所述化合物或者在其非结合状态下电化学可检测并且在结合状态下电化学无法检测，或者所述化合物在结合状态下电化学可检测并且在非结合状态下电化学无法检测，其中所述第二核酸进一步包括能够被所述处于活化状态的第一核苷酸的所述酶结构域识别的切割位点，其中在所述切割位点被切割之后，所述嵌入性氧化还原活性化合物在结合在所述第二核酸上时，会从所述第二核酸上释放出来。

10.根据权利要求9所述的传感器，其中所述第一核酸是DNA核酶，优选选自8-17DNA核酶和10-23DNA核酶。

11.根据权利要求9-10中任一项所述的传感器，其中所述第二核酸是形成茎-环的DNA探针，优选选自具有21个核苷酸并且形成茎环结构的核酸，例如CCTGAGAGAGrArUGGGTGCAGG。

12.根据权利要求9-11中任一项所述的传感器，其中所述嵌入性氧化还原活性的化合物选自亚甲蓝，菁蓝衍生物，吖啶衍生物，溴化乙啶，碘化丙啶，羟基脒衍生物，蒽醌衍生物，双苯甲亚胺衍生物比如Hoechst 34580，33258，33342，二茂铁基萘二酰亚胺，柔红霉素，蒽醌二磺酸，Co(bpy)₃³⁺和Co(phen)₃³⁺，其中bpy是联吡啶，以及其中phen是1，10-邻菲咯啉。