[发明专利]一种电化学传感器对微量赭曲霉毒素A进行检测的方法

说明书

技术领域

本发明涉及利用电化学传感器对赭曲霉毒素A进行检测，特别强调适体的应用、金纳米粒子在电化学中对电子传递的促进作用，以及该检测方法的高灵敏度及易操作性，属于电化学传感器技术领域。 

背景技术

电化学传感器是一种集具高灵敏度、可靠、方便于一体的检测手段，生物传感器是指各种生物体成分(酶、抗原、抗体、激素等)或生物体本身(细胞、细胞器、组织等)作为敏感元件的传感器。电化学生物传感器则是指由生物材料作为敏感元件，电极作为转换元件，以电势、电流或电阻为特征检测信号的传感器。本发明把适配体应用于电化学传感器，并于电极表面修饰上可以促进电子传递的金纳米粒子，大大提高了传感器的灵敏度，该传感器以玻碳电极作为工作电极，甘汞电极为参比电极，铂电极为对电极，以亚甲基蓝的循环伏安图谱为检测信号，通过对不同浓度赭曲霉毒素A标准品检测，建立标准曲线，达到对含赭曲霉毒素A样品进行定量检测的目的。 

发明内容

(一)要解决的技术问题 

本发明旨在发明一种基于适配体的电化学传感器，在玻碳电极表面修饰上单链DNA，并通过碱基配对将适体、金纳米粒子修饰的单链DNA修饰到电极表面，进而建立赭曲霉毒素A检测的标准曲线。本发明旨在建立灵敏度高、可操作性强的赭曲霉毒素A定量检测方法。 

(二)技术解决方案： 

一种电化学传感器对微量赭曲霉毒素A进行检测的方法：对玻碳电极进行修饰，做成适配体电化学传感器，对赭曲霉毒素A标准品进行检测，建立标准曲线，以达到对含赭曲霉毒素A样品进行定量检测的目的；步骤为 

(1)玻碳电极的抛光处理：将波碳电极依次用1μm、0.3μm、0.05μm的氧化铝粉末进行打磨处理；然后置于1∶1乙醇水溶液中超声5min； 

(2)金纳米粒子修饰的DNA的制备：将1mL浓度约为2×10^-9mol/L的金纳米粒子溶液以10000r/min离心15min，去掉上清液，将金纳米粒子再重新分散于50μL双蒸水中，将重分散后的金纳米粒子以10μL/管分装3管，于3管金纳米粒子溶液中分别加入10μL、20μL、30μL巯基修饰的单链DNA(购于上海 生工生物工程技术服务有限公司)，混合均匀，室温反应12h后，加入1μL 2mol/L的NaCl溶液，混合均匀，继续室温反应12h；然后将反应好的溶液跑电泳确定反应效果，没有反应上的金纳米粒子遇到电泳液中的盐会在胶孔中聚沉，呈蓝色，而与DNA反应的金纳米粒子不会聚沉； 

(3)玻碳电极的修饰：将抛光处理好的波碳电极作为工作电极在浓度为20mmol/L的对氨基苯磺酸溶液中，在0.01v/s下进行循环伏安扫描，对氨基苯磺酸基被修饰到电极表面； 

将扫描完的电极置于40m mol/L PCl₅溶液中30min，进行活化； 

(4)适配体电化学传感器的制备：将于上海生工生物工程技术服务有限公司购得的氨基修饰的单链DNA 6μL滴加于已完成活化的电极表面，待反应2h后，将电极放于清水中清洗5min，再将其置于5μmol/L适体溶液(购于上海生工生物工程技术服务有限公司)中反应12h，清洗电极，最后置于金纳米粒子修饰的DNA中反应12h，即制备得该电化学传感器。 

(5)对赭曲霉毒素A标准品进行检测，建立标准曲线：将修饰好的电化学传感器置于赭曲霉毒素A标准品溶液中反应，标准品溶液浓度依次为0ng/mL、0.1ng/mL、1ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL，每个浓度分别反应15min后，将电化学传感器置于8×10^-5mol/L亚甲基蓝溶液中反应10min。反应完成后，将电化学传感器作为工作电极，在0.1mol/L Tris-HCl中扫描循环伏安图谱。扫描完成后用超纯水洗涤1min，再进行下一个浓度的反应，进行扫描高电位为0.4v，低电位为0v，扫描速度为0.1v/s。根据扫描循环伏安图谱的氧化还原峰的电流值与对应的赭曲霉毒素A标准品浓度建立标准曲线；