[发明专利]一种利用RNA干扰技术培育抗粗缩病玉米的方法

说明书

技术领域

本发明属于转基因植物的培育技术领域，特别涉及一种利用RNA干扰技术培育抗粗缩病玉米的方法。

背景技术

玉米粗缩病是由玉米粗缩病毒(MRDV)所引起的一种病毒病。国内学者研究表明，此病是由灰飞虱传播的一种病毒性病害，其病原是一种具有双层衣壳的双链RNA球形病毒，主要由灰飞虱传播，只侵染单子叶植物。其寄主范围较广，有玉米、小麦、水稻、谷子和黑麦等。另外，还有一年生禾本科杂草，如狗尾、马塘、画眉、蟋蟀和白茅草等。田间冬小麦“绿矮型病株”及与丛矮病毒(WRSV)混生的矮缩病株，即是玉米粗缩病的初侵染源。研究资料表明，在玉米上传毒并造成危害的主要是灰飞虱第1代成虫，而灰飞虱则又是玉米粗缩病的主要传毒介体。研究结果表明，麦套夏玉米一般3～5片叶即可感病，而且感病越早，发病越重，经济产量损失也越大！

近年来，山东、山西、河北、北京、天津、陕西、云南等地都有发病严重甚至绝产的报道。玉米粗缩病已成为我国乃至世界玉米生产中的主要病害。发展到了不可忽视的地步。针对玉米粗缩病的发生与环境条件、播种日期、品种抗病性等因素有关，目前也采取了调整播期、加强田间管理、药物防治等措施来控制其发生，但是由于病毒繁殖快，易于变异，用传统的防治方法不能从根本上解决这一问题。

解决这一问题的有效策略是选育并推广抗病毒玉米品种。近年来逐渐兴起的RNA干扰技术(RNA interference，RNAi)，为各种作物的抗病毒育种研究开辟了一条新的途径。利用基因工程的方法可以将病毒基因导入优良玉米品种，获得对病毒的抗性。

RNA干扰(RNA interference，RNAi)是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA(double-stranded RNA，dsRNA)诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。

作为一种古老的生物体自我监督机制，RNAi是植物抵御外来核酸入侵，保持自身基因组结构完整性的一种有效策略。由双链RNA(dsRNA)介导的干扰现象作为细胞的一种防御机制可针对性地降解细胞内与之具有同源性的核酸(如病毒的核酸)，达到对病毒的抵抗，同时还调节细胞内编码基因的表达，为利用RNA介导的病毒抗性进行抗病毒基因工程的研究奠定了基础。

目前有分析玉米粗缩病基因序列以及寻找和筛选一些与玉米粗缩病抗性相关的分子标记的报道。如：Ba i等分离鉴定了引起中国禾本科作物矮化症状的水稻黑条纹矮化病毒(Identification of rice black streaked dwarf virusin different cereal crops with dwarfing symptoms in China.Acta Virol.2001；45(5-6)：335-9.)。Azuhata等研究表明水稻黑条纹矮化病毒与玉米粗缩病病毒基因同源性很高(Closes imilarity between genome structures ofrice black-streaked dwarf and maize rough dwarf viruses.J Gen Virol.1993，74(7)：1227-32.)。李常保等人利用RAPD标记方法寻找与玉米粗缩病(MRDV)基因紧密连锁的分子标记(李常保等，玉米抗粗缩病病毒(MRDV)基因的RAPD标记及其辅助选择效果研究，作物学报，2002年7月，28(4)：564～568)；何龙等人利用SSR标记方法，寻找与玉米粗缩病抗性基因连锁的SSR分子标记(何龙等，玉米粗缩病抗性基因SSR标记初步研究，广东农业科学，2008年，8：5～8)；陈艳萍等人利用SSR-BSA技术筛选玉米粗缩病抗性基因分子标记(陈艳萍等，利用SSR-BSA技术筛选玉米粗缩病抗性基因分子标记，江苏农业学报，2008，24(5)：590～594)。

通过上述方法找到了一些可能与玉米粗缩病抗性有关的分子标记，张举仁等也利用分子标记进行了抗粗缩病玉米选育(利用分子标记选育抗粗缩病的玉米，发明专利公开号：CN 101138313A)。但目前还未见利用RNA干扰技术培育抗粗缩病玉米成功的报道。

发明内容

本发明的主要目的就是针对上述抗粗缩病玉米的研究现状，提供一种利用RNA干扰技术培育抗粗缩病玉米的方法。

为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

一种利用RNA干扰技术培育抗粗缩病玉米的方法：