[发明专利]一种从甘薯块根中提取超氧化物歧化酶的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种提取超氧化物歧化酶的方法，特别是一种从甘薯块根中提取超氧化物歧化酶的方法。

背景技术

超氧化物歧化酶广泛存在于生物体内，其功能为清除对生物体有强烈毒性的超氧自由基，过多的自由基被认为是使细胞衰老到死亡的主要原因之一。近年来，发展了一些提取SOD的方法，并将其用于医药、保健、食品、化妆品和日用化学品等领域，取得了很好的效果，特别是对消炎、抗衰老、抗辐射损伤和抑制肿瘤生长等均有较好的作用。

目前，SOD制剂大多从动物血液或组织中提取制备，使得原材料不易收集、运输、储存和清洗，而且极易携带病原微生物，极不安全。已有一些SOD制品是从谷物包括玉米、大豆等作物种提取制备的，这些原料虽然来源广泛，生产的SOD也安全，但是利用粮食作物生产SOD不利于我国的粮食安全。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供了一种从非粮食作物甘薯的块根中大量提取SOD的方法。该方法原料来源广泛，成本极低廉，经特殊的热激处理，SOD得率高，纯度高，适合大量生产。

本发明方法具有如下步骤：

a、将甘薯块根洗净，置于38℃热激48小时，诱导大量超氧化物歧化酶的产生；

b、将诱导的甘薯块根粉碎并加入4℃下预冷的0.05M磷酸钾缓冲液匀浆抽提；

c、过滤，弃残渣，滤液在常温下2500rpm离心取上清液；

d、上清液加入2M醋酸，调节pH值为4.0，再次常温2500rpm离心，取上清液；

e、上清液加入2M氢氧化钠调整pH至7.5，常温2500rpm离心，收集上清液；

f、上清液中加入固体硫酸铵是上清液饱和度达到80％，4℃沉淀；

g、常温下，5000-6000rpm离心，收集沉淀，既得粗酶制剂。

具体的，本发明方法可按如下步骤实施：

1.将甘薯块根洗净，置于38℃热激48小时，热激可诱导甘薯产生大量超氧化物歧化酶，利于提高产率；

2.将诱导的甘薯块根粉碎，一边搅拌一边加入1∶1(重量体积比)4℃下预冷的0.05M磷酸钾缓冲液匀浆抽提；

3.过滤匀浆，弃残渣，滤液在常温下2500rpm离心取上清液；

4.上清液加入2M醋酸，调节pH值为4.0，再次常温2500rpm离心，取上清液；

5.上清液加入2M氢氧化钠调整pH至7.5，常温2500rpm离心，收集上清液；

6.上清液中加入固体硫酸铵是上清液饱和度达到80％，4℃沉淀；

7.常温下，5000-6000rpm离心，收集沉淀，既得粗酶制剂。

本发明具有如下优点：本发明工艺简单，操作方便，原料来源特别丰富，成本极其低廉，适宜大规模生产。副产品主要为淀粉，同样具有较大经济价值。通过将甘薯块根热激处理，可诱导SOD大量产生，大大提高了SOD的得率，一般可达到15U/gfw。

具体实施方式

实施例一使用本发明方法提取甘薯超氧化物歧化酶SOD

1、原料浸提

称取甘薯块根500g，洗净，置于38℃温箱热激处理48小时。取出块根粉碎成小块，加入300ml 4℃预冷的0.05M磷酸钾缓冲液，边加边匀浆抽提；匀浆后用140目尼龙布过滤，残渣加200ml4℃预冷的0.05M磷酸钾缓冲液，再次匀浆抽提；过滤抽提液，收集并合并两次的抽提液。滤液在室温下于2500rpm离心15min，去上清液。

2、选择性酸碱变性

于上述上清液中加入2M醋酸，调节pH至4.0，室温下于2500rpm离心15min，除去碱性蛋白，收集上清；上清液中加入2M氢氧化钠，调节pH至7.5，室温下于2500rpm离心15min，除去酸性蛋白，收集上清。

3、粗酶制备

上清液中加入固体硫酸铵，边加边搅拌至饱和度达到80％，置于4℃下3-4小时，使蛋白沉淀。常温下于5000-6000rpm离心20min，收集沉淀既得甘薯SOD粗酶制剂。

经测定，由本发明方法提取的甘薯超氧化物歧化酶SOD比活力达到了216v/mg，活力回收达到了51.6％，500g甘薯产酶455mg。

表1分离纯化结果

  步骤  总体积  (ml)  总蛋白  (mg)  总活性  (v)  比活性  (v/mg)  回收率  (％)  提取液  900  5450  190885  35  酸碱变性  920  790  155890  197  81.7  硫铵沉淀  95  455  98520  216  51.6