[发明专利]预测乳中金黄色葡萄球菌生长和产毒的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种预测金黄色葡萄球菌生长和产毒的方法。

背景技术

目前对于乳中金黄色葡萄球菌存在与否的检测方法主要有两种，即为国标的平板计数法和PCR检测法，但这两种方法都是测定取样那个时间点的样品中的金黄色葡萄球菌数量，如果要知道该样品中其它时间点下金黄色葡萄球菌的数量就需要重复地操作，操作复杂。现有的测定金黄色葡萄球菌肠毒素的方法主要是ELISA法和基于该方法的检测试剂盒，虽然检测试剂盒的灵敏度很好，但只能给出定性或半定量的结果，这样就会造成不能准确评估乳的危害性大小。

发明内容

本发明是为了解决现有检测乳中金黄色葡萄球菌菌数和金黄色葡萄球菌肠毒素的方法操作复杂、检测时间长的问题，而提供了一种预测乳中金黄色葡萄球菌生长和产毒的方法。

预测乳中金黄色葡萄球菌生长和产毒的方法按照以下步骤进行：一、检测乳中金黄色葡萄球菌的生长温度和乳中金黄色葡萄球菌的初始菌数，然后将待测样品温度代入y＝7.1917×10^-5×T²+0.022782×T-0.32889公式，计算得到乳中金黄色葡萄球菌的最大生长速率，其中T表示金黄色葡萄球菌的生长温度，y表示乳中金黄色葡萄球菌的最大生长速率；二、将步骤一中乳中金黄色葡萄球菌的初始菌数和乳中金黄色葡萄球菌的最大生长速率代入到公式log N(t)＝A+C[exp(-exp(-y(t-M)))]中，计算得到乳中金黄色葡萄球菌在时间t时的数量，其中exp＝e^x，t表示乳中金黄色葡萄球菌的生长时间，log N(t)表示在t时乳中金黄色葡萄球菌的数量，A是步骤一中乳中金黄色葡萄球菌的初始菌数[log10(cfu/mL)]，C表示乳中金黄色葡萄球菌在生长稳定期的菌数[log10(cfu/mL)]，M表示最大生长速率所对应的时间，y是在时间M的最大生长速率[(log10[cfu/mL])/h]；三、将步骤二计算得到的乳中金黄色葡萄球菌在菌数为10^6.4cfu/mL时所对应的时间t为毒素产生的起始时间，再结合公式F＝0.0018543×T²-0.050277×T+0.32629所得到的产毒速率，最终得到在温度T时乳中金黄色葡萄球菌的线性产毒曲线，F表示乳中金黄色葡萄球菌产毒速率，T表示表示金黄色葡萄球菌的生长温度，即实现了乳中金黄色葡萄球菌生长和产毒模型构建，根据该构建模型和被检测样品检测数据可准确的预测出未来任何时间点被检测样品乳中金黄色葡萄球菌生长和产毒情况。

根据平板计数法得到不同温度下金黄色葡萄球菌的生长数据，计算出各温度下的最大生长速率，最终得到生长速率相对于温度的曲线方程，即为步骤一中的方程y＝7.1917×10^-5×T²+0.022782×T-0.32889。

本发明步骤二中的log N(t)＝A+C[exp(-exp(-y(t-M)))]即为Gompertz公式。

使用试剂盒测定纯肠毒素样品，从而建立起测定毒素的定量标准曲线。使用试剂盒测定出相应各温度下的金黄色葡萄球菌毒素，并利用标准曲线计算出准确含量，从而构建出各温度下的产毒模型(均为相关系数大于0.99的线性模型)，并根据各温度下的产毒速率建立起相对于温度的产毒速率模型，即为步骤三中的方程F＝0.0018543×T²-0.050277×T+0.32629。

根据所测定的各温度下的生长和产毒曲线，发现毒素开始产生的时间均为金黄色葡萄球菌菌数达到10^6.4cfu/mL的时间，而与温度无关。

本发明的方法减轻劳动量并节省时间，只根据所测定样品的一个时间点的金黄色葡萄球菌数量就可以知道其后其它时间点的数量和毒素，操作简单，准确度高，极大的缩短了检测的时间，本发明的预测方法解决了现有方法操作复杂、检测时间长的问题。

附图说明

图1为具体实施方式一中Gompertz模型拟合的生长曲线例图；图2为具体实施方式一中SEA标准曲线图；图3为具体实施方式一中MATLAB7.6拟合的最适产毒曲线例图；图4为具体实施方式一中S.aureus生长与产毒的关系图；图5为具体实施方式一中S.aureus的生长速率曲线图；图6为具体实施方式一中S.aureus的产毒速率曲线图。

具体实施方式

本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式，还包括各具体实施方式间的任意组合。