[发明专利]一种微囊化细胞活性的检测方法

权利要求书

1.一种微囊化细胞活性的检测方法，其特征在于：将待分析的微囊化细胞样品机械破囊处理后，加入预热的裂解液中孵育裂解蛋白后，上清液采用高效液相色谱法分离定量腺苷酸，计算能荷，以腺苷酸种类数量变化以及能荷变化作为评价微囊化细胞活性的指标。

2.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：微囊化样品采用的机械破囊方法是将样品转移至注射器中，反复抽吸研磨破囊。

3.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：加入的裂解液组成是PH7.0-7.5，45-55mM HEPES，10-80mAU/ml蛋白酶k。

4.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：孵育裂解蛋白的条件是30-80℃水浴孵育15-45分钟，5分钟间隔震荡，再将反应体系转移至30-80℃水浴继续反应15-45分钟，过滤收集上清液。

5.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：采用高效液相色谱法对提取样品中腺苷酸进行分离，并对其中ATP、ADP、AMP含量定量，测定条件为紫外检测器，波长260nm，C18反相柱，流动相为PH＝7.0-7.5、50-200mM的K₂PO4，3-10mM的TBABr，流速0.5-1.0ml/min。

6.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：能荷的计算方法为

能荷＝([ATP]+0.5[ADP])/([ATP]+[ADP]+[AMP])

能荷＜0.5表明细胞已经走向凋亡；能荷＞0.5表明细胞存活，且数值越高细胞活性越好。

7.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：包埋在微囊内的细胞可以是贴壁培养或悬浮培养的动物细胞、植物细胞以及微生物细胞。

8.按照权利要求1所述的方法，其特征在于：制备微胶囊的材料包括海藻酸钠、聚乳酸、明胶或壳聚糖。