[发明专利]5′-酰化尿苷的制备方法及在制备治疗心脏病、肝病药物中的应用

说明书

技术领域：

本发明涉及一种5’-酰化尿苷的制备方法，尤其是一种操作简单、产出率高，适应于大规模工业化生产的5’-酰化尿苷的制备方法及5’-酰化尿苷在制备治疗心脏病、肝病药物中的应用。

背景技术：

核苷酸是生物体内重要的低分子化合物，具有许多生理功能，除作为DNA、RNA的前体，也作为生理、生化过程的调节物质参与体内蛋白质、糖类和脂肪的代谢；核苷酸可维持免疫系统的正常功能，如提高机体对细菌、真菌感染的抵抗力，增加抗体产生、增强细胞及体液免疫能力，刺激淋巴细胞增生作用等；研究表明，核苷酸还可维持胃肠道正常功能、参与调节肝的蛋白质合成；同时，核苷酸还具有抗氧化作用，核苷酸碱基的氮氧原子能够捕获氧化过程中形成的自由基，减少由脂质过氧化引起的细胞膜及各种DNA的损伤。

一般情况下，机体能够由内源小分子物质合成各种核苷酸，但近年来的许多研究表明，当机体迅速生长、受到细菌、病毒感染时，一些器官、组织(如肠、淋巴、骨髓细胞，包括肝脏、心脏等)内的核苷酸就不能满足机体组织和细胞代谢的需要，需补充外源核苷酸用以改善和促进受影响细胞的自然修复，以保证其组织生长和正常功能及达到治疗疾病的目的。但是直接补充的外源核苷酸，有时可能会因胃肠道、血脑屏障或他生物膜输送的限速，或者被核苷酶降解而不能被高剂量持续性的输送给组织。

5’-酰化尿苷是一种已知的嘧啶核糖核苷，但是迄今为止还没有关于其制备方法及可用于制备治疗心脏病、肝病药物的相关报道。

发明内容：

本发明是为了解决现有技术所存在的上述技术问题，提供一种操作简单、产出率高，适应于大规模工业化生产的5’-酰化尿苷的制备方法及5’-酰化尿苷在制备治疗心脏病、肝病药物中的应用。

本发明的技术解决方案是：一种5’-酰化尿苷的制备方法，其特征在于按如下步骤进行：

a.将核糖核酸RNA粉置于60℃水中溶解并控制PH值5.0～5.5，完全溶解后，升温至90～95℃，保持1小时后冷却降温至70℃；

b.加入RP1酶，保持温度至68～70℃酶解12小时，升温至90～95℃使酶失活；

c.酶解液冷却降温至30℃～35℃，将酶解液进行超滤纯化，得到超滤液；

d.将超滤液进行阴离子树脂柱交换分离，先用纯水透洗树脂柱，直至流出液紫外吸收值OD₂₆₀×稀释倍数＜20时，结束水洗；再用0.8M甲酸溶液清洗，当流出液紫外吸收值OD₂₅₄×稀释倍数≥30且OD₂₅₀/OD₂₆₀大于0.72小于0.78时，开始收集流出液，直至流出液紫外吸收值OD₂₇₉×稀释倍数＜20，结束收集；

e.将收集液调pH值5.0～6.0，通过纳滤浓缩至浓度120g/L，用NaOH溶液调PH值6.8～7.0，加2倍乙醇静置2小时后，离心得到5’-尿苷；

f.将5’-尿苷悬浮于吡啶与N.N二甲基甲酰胺按体积比为1∶1比例的溶液中，冰浴降温至0℃；

g.向混合液中逐渐加入等当量的酸酐，于0℃搅拌12～24小时，然后加入纯水，5℃真空蒸发溶剂；

h.用90％甲醇溶解残留物，吸附至硅胶粒中，蒸发掉多余溶剂；

i.再将剩余混合样液上的内有氯仿液的硅胶浆柱内，用氯仿-甲醇∶氯仿(20∶80)的洗脱液进行梯度线性洗脱，用薄板层析确定阶段洗脱液，收集所确定的阶段洗脱液，既得到所要的5’-酰化尿苷溶液，可重结晶或真空干燥，得到5’-酰化尿苷。

5’-酰化尿苷在制备治疗心脏病、肝病药物中的应用。

用本发明方法制备5’-酰化尿苷，操作简单、产出率高，适应于大规模工业化生产。当5’-酰化尿苷服用于动物或人体后，尿苷的生物利用性大大提高，降低了被核苷酶降解的速度，尿苷可通过胃肠道、血脑屏障及其他生物膜而被高剂量持续性的输送给动物或人体心脏及肝脏，血浆中尿苷浓度显著增高，比给予相同克分子剂量尿苷高5～10倍，有助于恢复心室肌的泵血功能、治疗肝病及肝脏损伤。

附图说明：

图1是本发明实施例与对比组的血浆中磺溴钛纳浓度示意图。

具体实施方式：

实施例：一种5’-酰化尿苷的制备方法，按如下步骤进行：

a.将核糖核酸(RNA)粉(购于福建珍奥核酸有限公司)，来源置于60℃水中溶解并控制PH值5.0～5.5，完全溶解后，升温至90～95℃，保持1小时后冷却降温至70℃；