[发明专利]诱导裙带菜孤雌生殖幼孢子体体细胞产生雌配子体的方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种裙带菜雌配子体的生产方法，尤其是一种操作简单、成本 低廉、所产出的雌配子体成熟率高、可为裙带菜规模化苗种生产提供大量雌配 子体的诱导裙带菜孤雌生殖幼孢子体体细胞产生雌配子体的方法。

背景技术：

裙带菜(Undaria pinnatifida)属于褐藻门、褐子纲、海带目、翅藻科、裙 带菜属，属于广温性藻类，其味道鲜美，营养丰富，含有包括全部人体必需氨 基酸的19种氨基酸、蛋白质、糖份和维生素，由于裙带菜的纤维素含量仅为干 重的3％左右，因此易于被人体消化，是深受消费者欢迎的健康食品。

裙带菜大型藻体为孢子体，每年秋季开始幼苗在自然海区出现，经过冬季 和春季生长成为1～2m的藻体，在春季藻体开始发育，在茎部形成特殊的生殖 器官孢子叶，在孢子叶表面形成孢子囊，在春夏季孢子囊成熟放出游孢子，进 入繁殖期，放散孢子后藻体死亡流失，结束为期1年的生活周期。种藻所放出 的孢子中约有50％形成雌配子体，50％形成雄配子体，雌雄配子体经生长后在水 温超过23℃时以休眠的状态度过夏季的高温期。在秋季水温下降后雌雄配子体 从休眠中复苏并逐渐发育成熟，雌配子体形成卵囊并排出卵，雄配子体形成精 子囊并放出精子，卵受精后萌发为幼孢子体，在适宜的水温条件下幼孢子体很 快生长成为裙带菜幼苗。

目前，裙带菜人工育苗生产中的采苗方式主要有孢子采苗和配子体采苗两 种方式，孢子采苗的缺点是采孢子时间受种藻繁殖季节限制，育苗时间在大连 地区达3个月以上，育苗成本高、风险大。配子体采苗是近年来开发并发展起 来的一种新的裙带菜采苗及育苗方法，其原理是在裙带菜繁殖期内将裙带菜孢 子大量采集在培养皿或烧瓶内，在室内适宜条件下培养成一定数量的雌雄配子 体，采用雌雄分离的方法可将雌雄配子体分离后单独培养，在秋季水温下降后， 采用配子体切碎的方法使配子体附着在苗绳上直接进入成熟阶段，雌配子体形 成的卵和雄配子体放出的精子受精形成裙带菜幼苗，育苗时间只有1个月左右， 降低了育苗风险，大幅度提高了育苗的成功率。配子体采苗另外一个优点是可 以使用分离培养的雌配子体和雄配子体进行不同品系和不同地方种间杂交，培 育出优质高产苗种。

但是，由于分离后的雌雄配子体数量有限，尤其是雄配子体细胞数量多， 一个细胞可形成多个精子囊相比，而雌配子体细胞数量少且只有枝端细胞能形 成卵囊，因此虽经过室内增殖培养但雌配子体仍难以达到规模化苗种生产对其 数量的要求。

发明内容：

本发明是为了解决现有技术所存在的上述技术问题，提供一种操作简单、 成本低廉、所产出的雌配子体成熟率高、可为裙带菜规模化苗种生产提供大量 雌配子体的诱导裙带菜孤雌生殖幼孢子体体细胞产生雌配子体的方法。

本发明的技术解决方案是：一种诱导裙带菜孤雌生殖幼孢子体体细胞产生 雌配子体的方法，按照如下步骤进行：

a.取保存培养的裙带菜雌配子体10mg，添加300ml消毒海水后用组织搅拌 机切碎至190～210μm藻段形成种雌配子体体液，将种雌配子体体液按1ml/培养 皿移至多个培养皿内，添加培养液后在温度为20℃、光照强度为2000Lx、光照 时间为12小时/日的条件下培养12天，培养液每3天全量交换1次；

b.将生长有孤雌生殖幼苗的培养皿在温度为15℃、光照强度为2000Lx、 光照时间为12小时/日的条件下继续培养至孤雌生殖幼苗长度达到0.4～0.6cm， 培养液每3天全量交换1次；

c.将孤雌生殖幼苗从培养皿底面上剥下，铺在经过灭菌消毒的载玻片上， 将幼苗假根从柄的部位去除，将剩余叶片移到烧杯内，添加培养液后在温度为 20℃、光照强度为2000Lx、光照时间为12小时/日的条件下培养2个月，培养 液每7天全量交换1次；

d.将多个生长雌配子体藻团的叶片移到组织捣碎机中，添加培养液后打碎 至490～510μm的藻段形成雌配子体体液，叶片湿重与培养液体积比为10mg∶ 300ml，汲取雌配子体液按1ml/培养皿移至多个培养皿中，添加培养液后在温度 为20℃、光照强度为2000Lx、24小时/日温度光照条件下培养2个月；