[发明专利]一种耐低温沼气菌剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于微生物发酵技术领域，具体地说是一种复合微生物发酵菌剂的制备方法。

背景技术

目前应于沼气生产的微生物，大都采用自然发酵或接种沼液、沼渣等方法。此种方法受环境温度影响较大，尤其北方地区冬季，沼气池出现产气量小，或不产气等现象，致使沼气池不能正常工作。大部分采取的措施为对沼气池采取加厚保温，或采取太阳能照射加温保温暖圈等措施，其缺点是增加使用者的基建投资，对老旧沼水的改造，还出现基建难度和进出料不方便等因素。

发明内容

本发明的目的在于提供一种由多种微生物组成，并在低温环境中生长、繁殖、发酵、产能在低温环境中产生沼气的微生物菌剂。

本发明的技术方案是：

一、本发明由以下菌种及其百分配重比，醋酸菌20-30％、乳酸菌20-30％、丁酸菌10-20％、酵母菌5-10％、甲烷菌20-30％。

二、本发明的制备工艺过程：

1.在北方地区冬季气温低于0℃的地区，选择能产生沼气的沼气池10个以上，分别取样50-100g。

2.将上述10个样品在实验室进行分离鉴定，采用选择性培养基，分别选出醋酸菌群、丁酸菌群、乳酸菌群、酵母菌群、甲烷菌群。

3.将上述5个菌株群进行单独培养，培养条件为：

培养基为1～2％庶糖，5-10％豆饼粉、3-4％蛋白胨、0.5-1％牛肉膏、0.5-1％mgSO₄·7H₂O、0.03-0.07％(NH₄)₂SO₄、0.01-0.03KH₂PO₄和0.01-0.05％Na₂HPO₄。培养时间2-4天。培养温度从15℃开始每下降2℃做一次培养，直致菌数增殖小于20-100％为止。接种量为1-5％，接种物为前一次温度递度下降菌液。

4.由此选出酵母菌最低温度5℃，乳酸菌最低温度3℃，醋酸菌温度4℃，丁酸菌温度8℃，甲烷菌温度7℃。

将该低温菌接入斜面试管冷藏，同时接入固体培养基，培养3天后，得到每克菌剂醋酸菌、乳酸菌、丁酸菌、酵母菌、甲烷菌，含菌数为0.5-1.2×10⁸、0.3-0.6×10⁸、0.2-0.4×10⁸、0.3-0.4×10⁸、1.2-1.6×10⁸个。

5.将上述五个能在低温环境生长繁殖的菌种接种在斜面试管中进行菌种冷藏。

6.将选择出五种菌种分别接种在上述培养基中培养，使每克固体培养基中醋酸菌、乳酸菌、丁酸菌、甲烷菌含菌数达到0.5-1.2×10⁸、0.3-0.6×10⁸、0.2-0.4×10⁸、0.3-0.4×10⁸、1.2-1.6×10⁸个。

7.按各菌种百分配重比，醋酸菌20-30％、乳酸菌20-30％、丁酸菌10-20％、酵母菌5-10％、甲烷菌20-30％进行复合，复合后各种菌数为1×10⁷以上，每克复合菌剂中有效治菌数1-10×10⁸个，含水量≤10％。

具体实施方式

选取内蒙古、河北、山西、银川等地区冬季10个样品，分别在醋酸菌、丁酸菌、乳酸菌、酵母菌、甲烷菌培养基中培养，镜检和培养基中观察选出各自菌株。将各自菌株接入1.5％庶糖、6％豆饼粉、3.2％蛋白胨、0.8％牛肉膏、0.5％mgSO₄·7H₂O、0.04％(NH₄)₂SO₄、0.02KH₂PO₄和0.02％Na₂HPO₄培养基中。接种量5％PH6.5-7.0，培养温度分别是摄氏度15℃、13℃、11℃、9℃、8℃、7℃、6℃、5℃、4℃培养。

按增殖小于30％停止接种培养，达到酵母最低温度5℃，乳酸菌最低温度3℃，醋酸菌温度4℃，丁酸菌温度8℃，甲烷菌温度7℃。