[发明专利]一种工业废水降解微生物菌株的培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种微生物菌株的培养方法，具体地说涉及一种 工业废水降解微生物菌株的培养方法；属于生物技术领域。

背景技术

工业废水污染是治理当前生态保护中一项非常重要和极具挑 战性的工作。来自印染、制药、农药、制革、石油化工和食品工 业等生产过程中的有机废水成分复杂、可生化性差，严重污染水 环境，甚至将削弱水生生物等的长期繁殖能力。现有的工业废水 的净化处理技术可归纳为生物法、化学法、物理-化学耦合法和物 化-生物耦合法等。其中生物法具有经济性好，无二次污染等优点。

现有的工业废水中对环境污染严重的主要有苯酚、苯胺和硝 基苯类化合物等。其中苯酚是造纸、炼焦、炼油、塑料、纺织等 工业废水中的主要污染物。硝基苯类化合物广泛应用于农药、染 料、炸药、橡胶以及其它化工产品的生产。环境中的硝基苯类污 染物主要包括硝基苯、硝基氯苯、硝基甲苯、硝基苯酚、硝基苯 胺等化合物。利用微生物降解苯酚、苯胺和硝基苯类化合物是一 种既经济且不会产生二次污染的方法，近年来，从工业废水污染 的环境中分离到许多可以降解苯酚、苯胺和硝基苯类化合物的微 生物菌株。盛连喜等人在应用生态学报，2007年7月，第18卷， 第7期中对硝基苯类化合物微生物降解研究进展，并从硝基苯类 化合物降解菌的驯化筛选，降解途径、降解激励、共代谢、趋化 性和分子遗传学角度，阐述了硝基苯类化合物生物降解的最近研 究进展。温洪宇等人在徐州师范大学学报(自然科学版)2003年 12月，第21卷，第4期中叙述了降解苯酚细菌的分离及生理学 特性研究，虽然它通过菌株培养、驯化与筛选从工业废水中分离 出两株可以降解苯酚的细菌，但是该菌株仅仅对苯酚具有降解作 用，对工业废水中同时具有苯胺和硝基苯类化合物的复合污染物 却不具有降解能力。

发明内容

本发明针对现有技术存在的缺陷，提供一种对复合污染物具 有降解能力的工业废水降解微生物菌株的培养方法。

本发明的目的是通过下列技术方案来实现的：一种工业废水 降解微生物菌株的培养方法，该方法包括以下步骤：

A、针对工业废水中的苯胺、苯酚和硝基苯类化合物，分别配 制含不同浓度梯度的目标化合物的液体培养基，其中苯胺和硝基 苯类化合物以其为唯一的碳源和氮源，苯酚另外添加氮源，所述 的液体培养基中还添加微生物菌株生长所需要的其它化学基质成 分，将部分液体培养基转化成选择性固体培养基；

B、将工业废水中的活性污泥加入到牛肉膏蛋白胨液体培养基 中进行富集，然后接种到含不同浓度梯度的目标化合物的液体培 养基进行驯化培养，培养温度为15-45℃，培养时间6-25天，反 复驯化培养2-12次，将驯化培养的菌株用选择性固体培养基进行 平板划线分离，并进行质粒抽提，获取分别以苯胺或硝基苯化合 物为唯一碳源和氮源，以苯酚为唯一碳源的含质粒菌株；

C、将假单胞菌株接种到牛肉膏蛋白胨液体培养基中进行富 集，富集后将其制成感受态细胞，将步骤B中得到的三种质粒菌 株和所述的感受态细胞重悬于LB液体培养基，在温度为10-40℃ 的条件下孵育10-45小时；再加入到含不同浓度梯度的三种目标 化合物的液体培养基进行驯化培养，驯化培养温度为15-45℃， 驯化培养时间6-25天，反复驯化培养2-12次，驯化培养后涂布 于选择性固体培养基，在温度为10-40℃的条件下孵育10-45小 时，然后进行质粒及降解能力鉴定；

D、将步骤C中获得菌株进行纯化后，即获得含质粒的工业废 水降解微生物菌株。

本发明针对废水中污染物的种类，采用含不同污染物种类的 液体培养基对活性污泥微生物进行驯化培养，再采用平板分离法 获取可以污染物为唯一碳源、氮源和能源的含质粒细菌。再加入 感受态的宿主菌，采用不同浓度的废水进行驯化，促进质粒转移， 并选择优势菌种，纯化后最终得到具有复合污染物降解能力的含 质粒的微生物菌种。