[发明专利]用于扩增来自麻疯树的细胞组织的方法

说明书

技术领域

本发明涉及扩增来源于含油植物种子的细胞，以及获得来自所产生细胞的油。

背景技术

含油植物的种子已被确定为生产可用作生物柴油等用途的油的来源。

一个实例是麻疯树(Jatropha curcas)植物，其具有含油的种子。除了用于医学、兽医学和制皂等以外，所述油还被认为适合作为高品质的生物柴油。来源于麻疯树种子的油具有与发动机所用柴油类似的物理化学性质和输出特性(参见Murali等的美国专利申请公开No.2008/0194026A1，第0008-0010段)。

因此，在现有技术中，已经描述了用于从器官、组织、细胞或原生质体产生麻疯树植物的微繁殖方法。(参见Murali等，第0014、0017和0024段)。所产生的植物可用作用于生产油的种子来源(参见Shuyi Qiu等的中国(CN)专利公开No.11225416A，摘要)。

遗憾的是，以用于生物柴油用途的大产量从麻疯树种子来产生油的可能性受到限制，这是因为收获通过微繁殖或传统繁育所产生的植物需要巨大的土地面积。

本发明提供了一种不需要植物栽培的生产来自麻疯树的油的方法。因此，本发明的方法不需要使用土地面积来生产来自麻疯树或来自其它含油植物的油。

发明内容

本发明提供了一种用于从由麻疯树种子组织扩增之细胞来产生油的方法，其中所述方法还适用于其它含油植物种子。所述方法包括从麻疯树种子的子叶获得外植体，将所述外植体接种到含有破坏细胞间结合的酶的培养基中，通过搅拌下进行的孵育产生扩增的独立细胞，从由麻疯树种子子叶组织得到的独立细胞而扩增的细胞中提取可用作生物柴油的油。

具体地，本发明的方法包括：从麻疯树种子获得外植体；将来源于麻疯树种子的所述外植体置于液体培养基中；在所述培养中破坏来自麻疯树种子的组织外植体的细胞间结合，其中所述外植体产生独立细胞；将所述培养基与由来源于麻疯树种子之外植体所产生的独立细胞孵育确定的时间，其中所述独立细胞在所述确定的时间内扩增；以及从由来源于麻疯树种子之外植体所产生的独立细胞而扩增的细胞中提取油。

在本发明方法的一个方面中，通过包括下列步骤的方法从麻疯树种子获得外植体：用乙醇对麻疯树种子消毒，其中用乙醇浸浴所述种子；用无菌水浸湿的纸将所述消毒的麻疯树种子水化，其中利用所述用无菌水浸湿的纸裹住麻疯树种子；用次氯酸钠对水化的麻疯树种子灭菌，其中用次氯酸钠浸浴所述水化的麻疯树种子；除去所述已灭菌麻疯树种子的皮，使得种子子叶从麻疯树种子中释放出来；以及从所述麻疯树种子子叶获得外植体。

本发明的方法可应用于任何含油植物。适用于任何含油植物的所述方法包括：

A.从含油植物种子获得外植体；

B.将来自所述种子的外植体置于培养基中；

C.破坏所述培养基中来自所述种子的外植体组织的细胞间结合，其中所述外植体产生独立细胞；

D.将所述培养基与由来源于所述种子的外植体所产生的独立细胞孵育确定的时间，其中所述独立细胞在所述确定的时间内扩增；以及

E.从由来源于所述种子的外植体所产生的独立细胞而扩增的细胞中提取油。

在本发明方法的另一个方面中，优选地，所述培养基至少含有NH₄NO₃、CaNO₃、CuSO₄、MnSO₄、ZnSO₄、H₃BO₃、KH₂PO₄、Na₂MoO₄、EDTA、FeSO₄、CaCl₂、CaCO₃、NaC₆H₇O₇(柠檬酸钠)、MgSO₄、K₂SO₄、硫胺素、甘氨酸、环己六醇(inositol)、烟酸、吡哆醇、生物素、谷氨酰胺、萘乙酸、玉米素和碳源。在本发明方法的培养基的一个方面中，所述培养基可含有选自CaNO₃和KNO₃的盐。

在本发明方法的培养基的一个方面中，所述培养基可含有选自CaCl₂和KCl的盐。

在本发明方法的培养基的另一个方面中，所述培养基可含有选自吲哚乙酸(IAA)、萘乙酸(NAA)和吲哚丁酸(IBA)的激素。