[发明专利]人参次苷H提取物及制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种中药提取物及其制备方法，特别涉及人参次苷H提取物及其制备。

背景技术

人参在治疗心脑血管疾病方面，有许多报道。

人参次苷，可治疗冠心病和缺血性中风。

人参次苷H为人参皂苷类成分经水解产生的次级皂苷，再经硅胶柱层析精制所得到的有效部位-H组皂苷，其主要组分为人参皂苷Rh1、Rh2和Rh3，其中Rh2为该药的主要成分，也是该药的主要抗癌活性成分。药效学研究表明：人参皂苷Rh2对肝癌、黑色素瘤B16、宫颈癌及肉瘤S180等癌细胞的增殖有显著的特异性的抑制作用。其作用机理为：在癌细胞增殖过程中，经人参皂苷Rh2作用，使癌细胞停止在一定的增殖期，并促使其逆转为正常细胞。含有人参皂苷Rh1、Rh2和Rh3的H组皂苷，为“人参次苷H”，体外实验研究发现人参次苷H对多种人源肿瘤细胞的增殖均有明显的抑制作用。

现有技术分离人参次苷H的效果不佳，本发明人在对人参次苷H提取物进行研究过程中，采用新的分离技术，试验出一组新的人参次苷H提取物及其制备方法，这些人参次苷H提取物具有疗效高，纯度高，吸收好，质量稳定，同时制备方法分离效果佳，含量高，工艺简单，操作方便，成本低廉，适合工业化生产。

发明内容

本发明提供一种人参次苷H提取物，其中，含人参总次苷以人参皂苷Rh₂(C₃₆H₆₂O₈)计，不少于60.0％，人参皂苷Rh₁和人参皂苷Rh₂含量之和不少于30％。优选的，本发明的提取物中人参皂苷Rh₁含量范围为1％-15％，人参皂苷Rh₂含量范围为10％-40％。

本发明的人参次苷H提取物，制备方法如下：

步骤1、含有人参皂苷类成分的药材，用水提取，提取液通过大孔吸附树脂柱，用乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩至干，得总皂苷；

步骤2、步骤1得到的总皂苷溶于酸溶液中反应，反应完成后调节PH至中性，收集沉淀物；

步骤3、沉淀物用乙醇溶解，拌入硅胶中，进行硅胶柱层析，用氯仿-甲醇进行洗脱，浓缩即得；

其中，步骤1中所述大孔吸附树脂为弱极性或非极性大孔吸附树脂，所述乙醇范围为30-95％；

步骤2中所述的酸溶液选自盐酸、硫酸或乙酸溶液，

步骤3所述氯仿-甲醇比例为10∶1-1∶1。

优选的，本发明的人参次苷H提取物，制备方法如下：

步骤1、选自西洋参叶、西洋参、三七、三七叶、人参或人参叶等含有人参皂苷类成分的药材经水提取，提取液通过大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，洗脱至流出液近无色，继用85％乙醇洗脱，收集85％乙醇洗脱液，浓缩至干得总皂苷；

步骤2、将总皂苷溶于20倍的PH1.0左右的酸溶液中，在40℃搅拌反应4h，反应完成后调节PH至近中性，析出沉淀，收集沉淀物，得人参总次苷粗品；

步骤3、人参总次苷粗品用乙醇加热使溶解，拌入2倍量的硅胶，干燥后粉碎过筛，进行硅胶柱层析，用氯仿∶甲醇＝10∶1-2∶1系统进行洗脱，薄层TLC检查洗脱结果，收集富含人参皂苷Rh₁和人参皂苷Rh₂的流份，浓缩。

本发明还提供本发明的人参次苷H提取物的质量标准：

(1)人参次苷H中人参总次苷含量以人参皂苷Rh₂计不得少于60％

对照品溶液的制备  精密称取经40℃减压干燥24小时的人参皂苷Rh₂对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.15mg的溶液，作为对照品溶液。

供试品溶液的制备  精密称取人参次苷H组合物10mg，用50ml正丁醇饱和的水超声5分钟后转移至分液漏斗，加入2g氯化钠溶解后，用正丁醇乙酸乙酯溶液(水饱和的正丁醇-乙酸乙酯1∶4)萃取三次，每次50ml，合并正丁醇乙酸乙酯层溶液，浓缩至干，残渣用甲醇溶解，定量转移至50ml量瓶中，稀释至刻度，摇匀，即得。

测定法精密量取对照品溶液及供试品溶液各1ml，分别置15ml具塞试管中，水浴蒸干，精密加入新配制的5％香草醛冰醋酸-高氯酸(1∶4)混合溶液2ml，摇匀，密塞，置60℃水浴中加热15分钟，取出，立即放入冰水中冷却2分钟，精密加入冰醋酸10ml，摇匀，以试剂作空白。照分光光度法(中国药典2005年版一部附录V A)，在550nm的波长处测定吸收度，计算，即得。