[发明专利]甘氨酸的测定方法与甘氨酸测定试剂盒

说明书

【技术领域】

本发明涉及食品检验测定技术领域，更具体地，本发明涉及甘氨酸测定方法及其试剂盒。 

【背景技术】

甘氨酸为非人体必需氨基酸。甘氨酸有独特的甜味，能缓和酸、碱味，掩盖食品中添加糖精的苦味并增强甜味。人体若摄入甘氨酸的量过多，不仅不能被人体吸收利用，而且会打破人体对氨基酸的吸收平衡而影响其它氨基酸的吸收，导致营养失衡而影响健康。甘氨酸不能被人体利用，只能分解转化为热能，这样会增加肝脏负担。而分解产物中的含氮化合物要通过尿液排出体外，又会增加肾脏负担。如果大量、长期食用这类食品，可能造成肝肾损伤。部分含乳饮料企业为提高产品中蛋白质含量，在生产加工中违规使用甘氨酸，对青少年及儿童的正常生长发育很容易带来不利影响。 

按照我国《食品添加剂使用卫生标准》GB2760规定，甘氨酸在作为食品添加剂只允许在调味剂与豆奶中使用，且最高限量为每公斤1克，但在含乳饮料中不允许使用。 

【发明内容】

[要解决的技术问题] 

本发明的目的是提供一种甘氨酸的测定方法。 

本发明的另一个目的是提供一种甘氨酸测定试剂盒。 

[技术方案] 

本发明是通过下述技术方案实现的。 

本发明的方法是一种采用酶比色法(Enzymatic Colorimetric Method)技术，利用测定还原型烟酰胺辅酶(还原型辅酶)在340nm波长处的吸光度变化测定甘 氨酸的方法。 

本发明甘氨酸测定方法的的技术原理是根据下述甘氨酸脱氢酶的催化反应完成： 

甘氨酸+水+辅酶甘氨酸脱氢酶乙醛酸+氨+还原型辅酶 

本发明的方法利用甘氨酸脱氢酶(glycine dehydrogenase；EC 1.4.1.10)酶促反应终点法。甘氨酸脱氢酶酶解甘氨酸反应，将辅酶(在340nm处没有吸收峰)还原成为还原型辅酶(在340nm处有吸收峰)，从而得以测定还原型辅酶在340nm处吸光度上升的程度，这样可以通过测量340nm处吸光度上升的程度，可以测算甘氨酸的浓度大小。 

本发明是通过下述技术方案实现的。 

本发明涉及一种甘氨酸的测定方法。该甘氨酸测定方法的步骤如下： 

A、样品准备： 

A.1标准样品的制备 

将一定量的甘氨酸溶于水或缓冲液中，再将甘氨酸浓度调整到1毫摩尔/升，得到的溶液作为标准样品； 

A.2待测样品的制备 

待测液体样品直接测试，无须预处理；将一定量的待测固体样品像制备标准样品一样溶于水或缓冲液中； 

A.3空白样品 

所述的水或缓冲液作为空白样品，其甘氨酸浓度为0毫摩尔/升； 

B、试剂溶液的制备： 

分别移取或称取缓冲液、稳定剂、辅酶与甘氨酸脱氢酶，然后将它们混合均匀，用水溶解得到所述的试剂溶液，它们的浓度分别是20-500mmol/L、0.001-7mol/L、0.1-5mmol/L与1000-80000U/L； 

C、待测样品与在步骤B)得到的试剂溶液按照体积比1/10至1/500进行混合，在温度15-45℃下反应5-60分钟，在主波长340nm与副波长405nm(如果受仪器限制可以不设副波长)下进行测定，测定其吸光度随时间的变化； 

D、在与步骤C)同样的条件下测定步骤A)标准样品的吸光度随时间的变化； 

E、在与步骤C)同样的条件下测定在步骤A)空白样品的吸光度随时间的变化； 

F、数据处理 

由步骤C-E)所述测定的主波长340nm的吸光度随时间的变化，根据下式计算得到甘氨酸的含量： 

式中： 

ΔA(样品)表示步骤C)得到的待测样品的吸光度变化； 

ΔA(空白)表示步骤E)得到的空白样品的吸光度变化； 

ΔA(标准)表示步骤D)标准样品的吸光度变化。 

根据本发明，在所述的甘氨酸测定方法中，所述的缓冲液应该理解是能够使其测定介质的pH基本保持稳定(一般是6.5-8.5)的溶液。如果该pH高于8.5或pH低于6.5，则该测定方法使用的酶的活性达不到预期的活性效果，因此需要添加更多的介质与酶，才有可能达到预期的活性效果。