[发明专利]一株阴沟肠杆菌及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一株微生物及其应用，属于生物技术领域。

背景技术

腐胺的化学名称为1，4-丁二胺，生物化学试剂和药物中间体。也是尼 龙-46、尼龙-6及尼龙-66的原料，尤其是尼龙-46广泛用于汽车、摩托车 的零部件材料，以代替金属；尼龙-66用于电子产品的材料；酸性气体吸 收剂。目前，制备方法有四种：(1)丙烯腈与氰化氢反应，生成乙二氰， 在催化剂作用下加氢而得；(2)以吡咯为原料，在碳酸钠存在下与盐酸 羟胺反应，生成丁二肟，再在钠汞齐作用下，在无水乙醇中加热而得；(3) 以2，5-二氨基戊酸为原料，加热催化脱羧而得。由此可见，目前腐胺的 生产方式能源消耗量大，对环境也有污染。我国腐胺需求量大，但国内企 业生产能力和产品质量有限，从国外进口价格很高。

通过微生物代谢产生腐胺(鸟氨酸在微生物产生的鸟氨酸脱羧酶的作 用下，脱羧产生腐胺)，获得高浓度腐胺液，然后分离腐胺，可降低腐胺 的生产成本和能源消耗，也成为研究的主要课题。

发明内容

本发明的目的在于：针对目前腐胺生产存在的问题，提供一种微生物 并通过该微生物代谢产生腐胺，获得高浓度腐胺液。

本发明的目的是这样实现的：一株阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae) xlcad001，其特征在于：保藏号为CGMCC No.3162，菌落在VRBDA琼 脂培养基上，30℃培养24h，红白色菌落，1.0-1.5×0.3-0.6μm，短杆，革兰 氏阴性，发酵葡萄糖产酸，该菌株在普通显微镜下呈杆状，该菌株16S rDNA 的Genbank登陆号为GQ890353。

在本发明中，VRBDA培养基为：酵母浸膏3g，蛋白胨7g，胆盐1.5g， 氯化钠5g，乳糖10g，中性红0.03g，结晶紫0.002g，琼脂15g，蒸馏水 1000ml，PH值7.3-7.5。

一株保藏号为CGMCC No.3162的阴沟肠杆菌的应用，其特征在于： 从斜面挑取菌落接种于装有A培养基的试管中，37℃静置培养24小时， 试管中的接种量为10⁵cfu/ml。在相同培养基反复活化五次后；将最后活化 后的菌液接种到B培养基中37℃静止培养4天，接种量为10⁶cfu/ml；将 培养后的菌液10000转离心10分钟，取上清液，获得高浓度腐胺液，高 浓度腐胺液的腐胺含量为4452.74μg/ml；

所述的A培养基为加入0.1％L-鸟氨酸的肠细菌增菌肉汤培养基；所 述的B液体培养基为加入0.005％磷酸吡哆醛和0.1％L-鸟氨酸的肠细菌增 菌肉汤培养基。

在本发明中，肠细菌增菌肉汤培养基为：蛋白胨10g，葡萄糖5g，磷 酸氢二钾2g，磷酸二氢钠8g，蒸馏水1000mL，在115℃灭菌15min，pH 值7.2～7.4。

本发明的优点在于：由于阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)xlcad001 产腐胺能力强，在上述方法制得的培养液中，腐胺含量可达到 4452.74μg/ml，用此方法生产腐胺将极大降低生产成本和减少污染。

附图说明

图1是阴沟肠杆菌在普通显微镜下的照片；

图2是标样的高效液相色谱图；

图3是高效液相检测阴沟肠杆菌培养液的色谱图；

图4是高效液相检测腐胺的标准曲线图。

具体实施方式

实施例1

菌株的筛选和保藏

培养基

肠道菌增菌肉汤培养基：蛋白胨10g，葡萄糖5g，磷酸氢二钾2g，磷 酸二氢钠8g，蒸馏水1000mL，在115℃灭菌15min，pH值7.2～7.4。

下层培养基：蛋白胨5g，酵母膏5g，牛肉膏5g，氯化钠2.5g，葡萄 糖0.5g，吐温1g，硫酸镁0.4g，硫酸锰0.03g，磷酸氢二钾2g，柠檬 酸三铵2g，碳酸钙0.1g，硫酸亚铁0.04g，维生素B₁0.01g，磷酸吡哆醛0.05g， 琼脂18克，鸟氨酸(115℃灭菌15min)；5克，1000ml蒸馏水，pH 5.0， 在115℃高压灭菌15分钟；

上层培养基：溴甲酚紫0.06g，琼脂20g，1000ml蒸馏水，pH5.0，在 121℃灭菌10min；