[发明专利]菌核净的多克隆抗体及其制备和应用

权利要求书

1.一种菌核净的多克隆抗体，由半抗原与牛血清蛋白BSA偶联获得免疫抗原，免疫新西兰大白兔后获得，其特征在于：半抗原为菌核净-2-戊二酸半酯。

2.如权利要求1所述菌核净的多克隆抗体的制备，其特征在于：将菌核净-2-戊二酸半酯用活性酯法与牛血清白蛋白偶联，合成免疫抗原，再将免疫抗原用于免疫新西兰大白兔，获得菌核净的多克隆抗体。

3.根据权利要求2所述菌核净的多克隆抗体的制备，其特征在于：活性酯法合成免疫抗原的步骤是：

称取21mg菌核净-2-戊二酸半酯溶于0.4mL二甲基甲酰胺中，再加入N-羟基琥珀酰亚胺7.17mg和环二己基碳酰亚胺13.76mg，充分混匀，室温避光静置过夜；

次日10000g离心10min，弃去沉淀，将上清液缓慢加入到3mL含有25mg牛血清白蛋白BSA的硼酸缓冲液中，硼酸缓冲液的pH为8.7，反应液在室温下继续磁力搅拌4小时；

反应结束后，将反应混合液装入透析袋中，在去离子水中4℃透析3天，每8小时换水一次，透析结束后获得免疫抗原，分装并保存于-20℃冰箱中备用。

4.如权利要求1所述菌核净的多克隆抗体的应用，其特征在于：将多克隆抗体采用间接竞争性ELISA法对样品中菌核净农药的残留进行检测，检测中使用的包被抗原为半抗原通过活性酯法与卵清蛋白OVA的偶联物。

5.根据权利要求4所述菌核净的多克隆抗体的应用，其特征在于：活性酯法合成包被抗原的步骤是：

称取21mg菌核净-2-戊二酸半酯溶于0.4mL二甲基甲酰胺中，再加入N-羟基琥珀酰亚胺7.17mg和环二己基碳酰亚胺13.76mg，充分混匀，室温避光静置过夜；

次日10000g离心10min，弃去沉淀，将上清液缓慢加入到3mL含有25mg卵清蛋白OVA的硼酸缓冲液中，硼酸缓冲液的pH为8.7，反应液在室温下继续磁力搅拌4小时；

反应结束后，将反应混合液装入透析袋中，在去离子水中4℃透析3天，每8小时换水一次，透析结束后获得包被抗原，分装并保存于-20℃冰箱中备用。

6.根据权利要求4或5所述菌核净的多克隆抗体的应用，其特征在于：多克隆抗体采用间接竞争性ELISA法对样品中菌核净农药的残留进行检测是指：将被测植物样品提取、净化后制备得到ELISA待测液，然后利用间接竞争性ELISA法进行检测，最后通过标准曲线计算出待测样品中的菌核净含量。