[发明专利]一种提高液体氨肽酶稳定性的方法及该酶的应用

权利要求书

1.一种提高液体氨肽酶稳定性的方法，其特征是枯草芽孢杆菌Zj016的发 酵液经离心、澄清、超滤浓缩、脱盐、醇沉、复溶、控制pH和/或添加稳定剂 或辅因子提高稳定性，得食品级液体氨肽酶，工艺为：

A枯草芽孢杆菌Zj016发酵液中氨肽酶的提取：

(1)发酵液经10000rpm，4℃离心10min后，取上清，弃沉淀；

(2)向收集的上清液中加入(NH₄)₂SO₄，边加边搅拌，至(NH₄)₂SO₄质量 分数达16％-20％，以10000rpm，4℃离心10min后，弃沉淀，收集澄清液；

(3)将收集到的澄清液进行超滤浓缩，浓缩2.5-3倍，所选用超滤膜截 留分子量为50kDa；室温，操作压0.1Mpa，pH自然，流速30～35mL/min； 弃透过液；

(4)将得到的超滤浓缩液进行超滤脱盐，所选用超滤膜截留分子量为 30kDa，室温，操作压0.1Mpa，流速40～45mL/min；弃透过液；

(5)将脱盐后的液体，加乙醇进行沉析，乙醇预冷，醇沉在冰浴中进行， 醇沉时pH 9，至乙醇终浓度达68％-70％时得氨肽酶沉淀，静止10min后， 8000rpm，4℃离心10min，弃上清，取沉淀；

(6)醇沉后把沉淀用pH9、0.05mol/L的Tris-HCl缓冲液溶解成酶液，控 制酶液为6000U/mL，4℃低温保藏；

B提高液体氨肽酶的稳定性：

(1)控制酶液pH为5时稳定性最好，4℃一个月后相对酶活为80％；

(2)添加苯甲酸钠作为稳定剂，控制酶液中苯甲酸钠质量浓度为0.1％时， -20℃保藏，一个月后相对酶活为80％；

(3)添加0.2μmol/L Co²⁺，4℃一个月后，相对酶活保存率90％；

采取以上措施之一项，或(1)和(2)两项，或(1)和(3)两项。

2.用权利要求1所述方法制得的高稳定性液体氨肽酶的应用，其特征是用 于大豆分离蛋白深度水解，步骤为：

(1)大豆分离蛋白配底物浓度为6％溶液后，在85℃恒温水浴15min；

(2)冷却至室温，调pH8.5；

(3)调温到50℃，加入氨肽酶量为E/S＝2.5～3.25×10⁵U/g，不断的搅拌， 用2mol/L NaOH滴定，维持反应pH值8.5，精确到±0.1；

(4)反应4h后，使水解液迅速升温至90℃加热10min，钝化水解液。