[发明专利]防除连作烟草黑胫病的拮抗菌及其微生物有机肥料

权利要求书

1.用于防除连作烟草黑胫病的拮抗菌，该菌株C-5属于多粘类芽孢杆菌(Paenibacillus polymyxa)，于2009年9月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC No.3303，主要生物学特性为：革兰氏染色阳性G⁺，细胞形状为杆状，芽孢椭圆形，兼性厌氧生长，V.P.反应阳性，甲基红试验阳性，发酵蔗糖、葡萄糖、甘露醇、山梨醇等产酸产气，淀粉水解阳性，明胶水解阳性，最适生长温度30℃，最适pH为7.0。

2.用权利要求1所述拮抗菌所生产的防除连作烟草黑胫病微生物有机肥料。

3.根据权利要求2所述的防除连作烟草黑胫病微生物有机肥料，其特征在于：该肥料中含有1×10⁸个/g以上的拮抗菌C-5、全氮质量比含量为4～5％，全氮中质量比90％以上为有机氮，总氮磷钾养分质量比为6～10％、有机质质量比含量为30～35％。

4.权利要求2或3所述防除连作烟草黑胫病微生物有机肥料的生产方法，包括：

1)将权利要求1所述的菌株C-5接种到PDA培养液，进行液体发酵生产，其发酵生产的条件为：初始pH范围为6.8-7.2，培养温度28-35℃，通气量为每分钟体积比为0.5，搅拌速度为170转/分钟，发酵中后期形成芽孢，发酵培养液含菌量≥5×10⁹个/ml；所用PDA培养液配制方法为，以配制1L培养基为例：

用200g土豆削皮后切成小块放到水里煮，沸腾后煮30min，经过滤后滤液中加20g普通蔗糖，定容至1000ml，pH值调至7.2-7.4，121℃灭菌20min；

2)将C-5发酵液按50L/吨的量分别接种到腐熟的猪粪堆肥和菜粕微生物酶解混合物中进行固体发酵，发酵温度为30-50℃，发酵过程中每天翻堆1次，发酵5-7天后结束，使拮抗菌含量达到1×10⁸个/g以上，分别获得猪粪堆肥、菜粕微生物酶解混合物的拮抗菌C-5固体菌剂；

其中菜粕的微生物酶解混合物制备方法为，将ZL200610086126.0中公开的保藏号为CGMCC NO.1543的嗜麦芽寡养单胞菌(Steno trophomonas maltophilia)菌株37-1发酵液加入到菜粕原料中，调节含水量55-65％和pH6.0-7.5，进行开放式固体发酵，待发酵温度上升至50℃时立即开始翻堆，以后每天翻堆，使堆温始终维持在35-50℃共5天，固体发酵开始后，堆物的pH会不断上升，每次翻堆时用含酸液体调节含水量和pH，使它们分别维持在55-65％和6.0-7.0，发酵终止时再用含酸液体进行喷洒，直至堆物pH调整为5.0左右，再进行低温干燥或自然凉干，即为菜粕的微生物酶解混合物；

3)再将猪粪堆肥的固体菌剂按体积比50-70％与菜粕微生物酶解混合物的固体菌剂按体积比30-50％的比例充分混合，并后熟2-3天，后熟过程中翻堆2次，最后在温度不超过60℃的条件下将微生物有机肥的含水量蒸发至30％以下，包装出厂即为防除连作烟草黑胫病的微生物有机肥料。

5.根据权利要求4所述微生物有机肥料的生产方法，其中步骤2)所用腐熟后的猪粪堆肥为发芽指数98％以上，有机质质量比含量≥35％，有机氮质量比含量为1.2-2％，含水量质量比25-30％。

6.权利要求2或3所述微生物有机肥料在防除连作烟草黑胫病中的应用。