[发明专利]双基因活化的骨-软骨复合移植体及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种双基因活化的骨-软骨复合移植体，其特征是：将种子细胞种植在两种不同基因活化 过的双层支架材料中，利用原位基因转染原理，同时诱导了上下两层种子细胞分别向软骨 细胞和成骨细胞分化，从而在体外形成组织工程化的骨-软骨复合移植体；所用种子细胞 为骨髓间充质干细胞；所述支架材料为壳聚糖和明胶，所述两种基因，一种是任何已知的 诱导干细胞向软骨细胞分化的基因，即转化生长因子或成纤维细胞生长因子或类胰岛素生 长因子或血小板衍生生长因子，另一种是任何已知的诱导干细胞向成骨细胞分化的基因， 即骨形态发生蛋白或血管内皮细胞生长因子或降钙素基因相关肽或核心结合因子α1。

2.根据权利要求1所述的双基因活化的骨-软骨复合移植体的制备方法，其特征是由以下两 个步骤构成：

(1)支架材料的制备：将能诱导干细胞向软骨细胞分化的质粒DNA的溶液滴加在支架 材料中，在4℃条件下，让质粒和支架材料复合12小时，制成软骨层支架材料，将能诱 导干细胞向成骨细胞分化的质粒DNA溶液滴加在另一个支架材料上，在4℃条件下，让 质粒和支架材料复合12小时，制成成骨层支架材料，支架材料为壳聚糖和明胶，质粒和 支架材料的质量比为1μg/mg～100μg/mg；

(2)含有种子细胞的双层支架制备：首先将种子细胞分别种植在软骨层支架材料和成骨 层支架材料中，然后将软骨层支架材料和成骨层支架材料上下粘结，形成带有种子细胞的 双层支架体系，所述的软骨层和成骨层粘结的方法为用0.5％-5％浓度的琼脂糖溶液将两层 支架连在一起或用一定浓度的壳聚糖明胶混合溶液将两层支架连在一起或用一定浓度的 海藻酸钠和Ca²⁺溶液将两层支架连接在一起，上述种子细胞为骨髓间充质干细胞。