[发明专利]从中药中筛选SARS冠状病毒主蛋白酶抑制剂的方法

说明书

技术领域

本发明涉及药物的筛选方法及具有相同结构骨架的小分子抑制剂，更具体 而言，涉及以SARS冠状病毒主蛋白酶的体外抑制活性测定为基础，从中药例 如黄芩中筛选SARS冠状病毒主蛋白酶抑制剂的方法，以及由此导出的一系列 黄酮类化合物抑制剂。

背景技术

SARS(Severe Acute Respiratory Sydrome)为引起严重急性呼吸道综合症(非 典型性肺炎)的简称，其病原体为冠状病毒属的一种病毒(Peiris J.等.Lancet， 2003，361：1319-1325)。冠状病毒是正链RNA病毒。冠状病毒属隶属于冠状病毒 科。在目前已知的正链RNA病毒中，它们的基因组是最大的(Siddell，S.G.等 Coronaviruses，toroviruses，and arteriviruses.in Topley & Wilson′s Microbiology and Microbia Infections，10th edition，Vol.Virology(eds.Mahy，B.W.J.&ter Meulen，V.) 823-856(Hodder Arnold，London，2005)。这个属含有约26个种；按照它们的自然 宿主、基因序列以及血清型关系，这个属又可以被分为三个组群(group)：其中 第一组群有TGEV，Porcine Transmissible Gastroenteritis Virus(猪传染性胃肠炎病 毒)等；第二组群有SARS冠状病毒，MHV(鼠肝炎病毒)等；第三组群有AIBV， Avian Infectious Bronchitis Virus(禽传染性支气管炎病毒)等(Spaan，W.J.M.和 Cavanagh，D.Coronaviridae.in Virus taxonomy，VIIIth Report of the ICTV.945-62 (Elsevier-Academic Press.，London，2004)。

SARS冠状病毒2/3到3/4的基因组编码了两个复制酶多蛋白(replicase polyproteins)pp1a和pp1ab(Ziebuhr，Snijder等.2000；Thiel，Herold等.2001； Anand，Yang等.2005；Ziebuhr 2005)，它们只有在病毒编码的蛋白酶切割成独立 亚基之后才能使病毒完成正常转录、复制功能(Ziebuhr，Snijder等.2000；Anand， Yang等.2005；Bartlam，Yang等.2005)。SARS冠状病毒主要蛋白酶(main protease，简称主蛋白酶)在这个过程中起主要作用。如果能够抑制SARS冠状病 毒主蛋白酶的水解作用，那么将会有效地抵御SARS冠状病毒对人体的侵染。 因此，SARS冠状病毒的主蛋白酶是抗SARS药物筛选的一个主要靶标。

2003年爆发的SARS病毒感染在全世界造成8096例病例，774例死亡。虽 然到今天为止未再发生感染，但不排除SARS及其变种卷土重来的可能性。2003 年SARS病毒感染时已有用中药预防或救治的先例。从中医的辩证论治角度讲， SARS病毒感染造成的疫情与清代大面积流行的“温病”颇有相似，温病是感受 温邪引起的多种急性外感热病的总称(康锁彬，徐树楠。《(吴鞠通医方精要)》，石 家庄：河北科学技术出版社，14-38，2003)。清代著名温病学家，如叶天士、吴 鞠通等治疗温病无不以清热解毒类中药组方论治。中药黄芩在我国已有几千年 的应用历史，早在张仲景的《伤寒论)》里就有经方“黄芩汤”。黄芩性苦，味寒， 归肺、胃、胆、大肠经。清热燥湿，泻火解毒，止血安胎。现代药理研究证明， 黄芩对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等细菌，流感病毒、乙型肝炎病毒等病毒均 有抑制作用(黄兆胜。《中药学》，北京：人民卫生出版社。79，2002)。

目前还没有以SARS冠状病毒主蛋白酶的体外抑制活性测定为基础，从清 热解毒类中药例如黄芩中筛选SARS冠状病毒主蛋白酶抑制剂的应用报道。本. 发明应用SARS冠状病毒主蛋白酶的体外酶活筛选方法，提供了一种从中药例 如黄芩中筛选SARS冠状病毒主蛋白酶抑制剂如黄芩苷元(baicalein)及其衍生物 的方法。

发明内容