[发明专利]一种能够准确控制铵根含量的甘草酸二铵盐的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种能够准确控制铵根含量的甘草酸二铵盐的制备方法，以及能够准确监测铵根含量的靛酚蓝比色法在制备过程中的应用。

背景技术

甘草酸为中药甘草中最主要的活性物质。甘草酸母核分子结构如下：

该分子结构具有如下两个特点：

其一、结构中存在三个羧基，可能形成单铵盐、二铵盐或者三铵盐。

其二、在18H处(结构图中标“＊”部分)存在一个异构中心，可以形成18α、18β两种构型的异构体，这两种异构体分子结构分别如下：

18α-甘草酸              18β-甘草酸

甘草酸类化合物通常为上述两种构型的混合物。

甘草酸类药物具有广泛的药理活性，通过作用于激素受体，影响离子通道，激活或抑制酶活性，调节物质代谢，调节胆碱能神经的兴奋性，具有肾上腺皮质激素样作用而无其副作用，抗炎抗变态反应明显，并有抗病毒、免疫调节、保护膜结构、抗溃疡和解痉作用。临床上主要用于伴有谷丙转氨酶升高的急、慢性病毒性肝炎的治疗，取得了显著的效果。

已知天然甘草中甘草酸构型以18β为主，在早期开发的以甘草甜素片及甘草酸单铵注射液为代表的甘草酸类药物的第一、第二代产品中，其甘草酸构型均以18β为主。

随着研究的深入，发现因立体构象的不同，甘草酸药物的疗效及不良反应存在一定的差异，18α构型比18β构型抗D-氨基半乳糖肝损害作用更好，肾上腺皮质激素样副作用更低。

二十世纪九十年代，以18α构型为主的甘草酸二铵原料及其注射液成功开发上市，属甘草酸类药物的第三代产品。

甘草酸二铵与甘草酸单铵的结构差别主要表现在铵根含量以及18α-、18β-甘草酸构型组成比例的不同：顾名思义，甘草酸单铵为单铵盐，而甘草酸二铵应为二铵盐；同时，甘草酸单铵以18β构型为主(EP5.0规定其含18α-甘草酸＜10％)，而甘草酸二铵以18α构型为主。然而，令人遗憾的是，我们在研究中发现，目前上市的甘草酸二铵产品对于铵根的含量以及18α、18β构型的组成均未能加以明确控制：目前国内现有甘草酸二铵标准中仅包含对铵根的定性鉴别，缺少专属性强的可以区分甘草酸单铵盐与二铵盐的定量鉴别方法；同时，国内药品标准方法均不能分离18α-、18β-甘草酸，标准中也未明确规定18α、18β构型的组成比例，从而造成产品内在质量控制的严重缺失。

甘草酸二铵的水溶性优于甘草酸单铵，给制剂带来便利。然而甘草酸分子结构中存在三个羧基，在甘草酸二铵的合成中，如何确保其得到的产物为二铵盐，而不是单铵盐或者三铵盐，是合成工艺中亟待解决的问题。由于缺少有效的监测手段，目前大多数生产厂家的制备工艺中事实上无法对铵根的含量进行准确的控制，由于铵基易于分解，往往在结晶及干燥过程中已成为甘草酸单铵，并不能获得真正意义上的二铵盐。要解决这一问题，首先必须建立铵根的定量检测方法。然而由于甘草酸二铵中铵根含量很低，给其定量检测带来了难度。可喜的是，我们根据靛酚蓝比色法的原理，创造性地用于甘草酸二铵分子中铵根含量的测定，方法简便、准确，解决了甘草酸二铵合成工艺及质量控制中铵根含量的控制问题，从而确保制备得到真正意义上的甘草酸二铵。

同时，18位构型组成也是甘草酸二铵盐的关键质量指标之一。然而由于18α-、18β-甘草酸结构非常接近，给其分离测定带来了难度。在甘草酸二铵的合成工艺中，有的生产厂家通过不同构型最大吸收波长及比旋度的差异控制构型的组成，然而其方法较为粗陋，不能明确测定混合物中构型的组成比例。我们通过实验，建立了能有效分离18α-、18β-甘草酸的高效液相色谱方法，用于甘草酸构型组成的定量分析并用于合成工艺中甘草酸构型的监控，从而使得我们可以采用18α构型的甘草酸单铵，或者18β构型的甘草酸单铵，或者18α和18β任意比例组成的混合物为起始原料最终制得具有明确的构型组成的甘草酸二铵。该方法简便、准确，成功解决了甘草酸二铵合成工艺及质量控制中18α、18β构型组成比例的控制问题。

发明人采用上述质量控制方法对部分上市甘草酸二铵产品进行了铵盐含量及构型组成的分析。令人震惊的是，我们发现所测定的上市甘草酸二铵产品实际上基本为单铵盐；更令人担扰的是，我们发现所测定的已上市甘草酸二铵产品实际上均为18α、18β构型的混合物(其中18α-构型约占70％～80％，18β-构型约占30％～20％)，然而不同厂家产品的构型组成存在较大的差异。