[发明专利]一种重组腺病毒及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种重组腺病毒，含有MLK3PRD cDNA以及腺病毒载体，其中所述 重组腺病毒通过下述方法制备：

1)以SD雄性大鼠海马为材料，提取大鼠海马总RNA；

2)以合成的上游引物5’-ggtacctaatgtcagatgactcatcccc-3’，和下游引物 5’-gaattctcagggccctgcttctggt-3’进行RT-PCR扩增得到MLK3PRD cDNA；

3)将获得的MLK3PRD cDNA定向克隆至质粒表达载体，获得重组质粒；

4)将步骤3)获得的重组质粒亚克隆至穿梭质粒载体，获得包含MLK3PRD  cDNA的穿梭质粒载体；

5)将步骤4)获得的穿梭质粒载体与腺病毒载体进行同源重组，获得腺 病毒表达载体；

6)将步骤5)获得的腺病毒表达载体线性化，转染至腺病毒包装细胞中， 扩增、纯化后获得所述重组腺病毒。

2.权利要求1所述的重组腺病毒，其特征在于，所述腺病毒载体为复制缺 陷型腺病毒载体。

3.权利要求1所述重组腺病毒的制备方法，包括如下步骤：

1)以SD雄性大鼠海马为材料，提取大鼠海马总RNA；

2)以合成的上游引物5’-ggtacctaatgtcagatgactcatcccc-3’，和下游引物 5’-gaattctcagggccctgcttctggt-3’进行RT-PCR扩增得到MLK3PRD cDNA；

3)将获得的MLK3PRD cDNA定向克隆至质粒表达载体，获得重组质粒；

4)将步骤3)获得的重组质粒亚克隆至穿梭质粒载体，获得包含MLK3PRD  cDNA的穿梭质粒载体；

5)将步骤4)获得的穿梭质粒载体与复制缺陷型腺病毒载体进行同源重 组，获得腺病毒表达载体；

6)将步骤5)获得的腺病毒表达载体线性化，转染至腺病毒包装细胞中， 扩增、纯化后获得所述重组腺病毒。

4.权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述穿梭质粒载体为 pAdTrack-CMV。

5.权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述复制缺陷型腺病毒载 体为pAdEasy。

6.权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述腺病毒包装细胞为 HEK293细胞。

7.权利要求1所述重组腺病毒或其表达产物在制备混合系激酶3抑制剂 方面的应用。

8.权利要求1所述重组腺病毒或其表达产物在制备神经保护药物方面的 应用。

9.权利要求8所述的应用，其特征在于，所述神经保护药物包括用于治 疗包括退行性脑病、脑卒中以及癫痫的神经系统疾病的药物。

10.根据权利要求7或8所述的应用，其特征在于，所述重组腺病毒被制 备成注射剂、喷涂剂、滴剂、喷雾剂或冻干粉。