[发明专利]一种制备修饰有抗体的微悬臂梁的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种制备修饰有抗体的微悬臂梁的方法。

背景技术

微悬臂梁传感技术是在微电子机械系统(MEMS)技术和原子力显微镜(AFM) 发展的基础上迅速发展起来的一种新型传感技术，是纳米传感技术研究的新热点。 研究发现，当微悬臂梁单侧表面上有生化反应发生时，其表面应力的改变将会导致 微悬臂梁产生弯曲变形或者振动特性改变，结合光学或电学方法进行读出。基于依 靠免疫特异性识别建立的微悬臂梁免疫传感技术，结合酶联免疫检测技术(ELISA) 的优点，使检测技术得到了较大的提升。该项技术可以不需要标记物，灵敏度高， 并且容易实现大尺度、高通量、平行阵列测量的显著优势。近年来，这项新兴技术 在对癌症检测、DNA杂交和转录因子等方面都得到了广泛的应用，但是在食品与环 境安全领域监测的研究并不多见。

微悬臂梁免疫传感技术的广泛应用的前提是如何将灵敏度高、特异性强的抗体 有效结合到微悬臂梁的金膜上，同时尽量降低该抗体活性的损失。目前，国内外文 献报道的方法主要通过具有双功能基团的巯基化试剂进行，通过在抗体上引入巯基 以实现抗体和金膜的结合，从而达到检测的目的(中国专利CN101407548)，但这 种直接巯基化抗体的方法，需要对每种抗体都进行巯基化后才能检测，使用麻烦， 另外直接巯基化抗体容易引起抗体活性的损失，因而限制了微悬臂梁免疫传感技术 的广泛应用。

发明内容

本发明的目的是提供一种制备修饰有抗体的微悬臂梁的方法。

本发明所提供的制备修饰有抗体的微悬臂梁的方法，由如下步骤组成：

1)通过巯基化将抗抗体连接到带有金膜的微悬臂梁上，得到修饰有抗抗体的 微悬臂梁；

2)通过抗体与抗抗体的相互结合作用，将抗体连接到所述修饰有抗抗体的微 悬臂梁上，得到修饰有抗体的微悬臂梁。

上述方法中，所述抗抗体可为鼠源抗抗体；所述抗体可为鼠源抗体。

上述方法中，所述鼠源抗抗体可为羊抗鼠抗抗体；所述鼠源抗体可为鼠源单克 隆抗体或鼠源多克隆抗体。

上述方法中，所述鼠源单克隆抗体具体可为抗脱落酸单克隆抗体或抗玉米素核 苷单克隆抗体。

上述方法中，所述通过抗体与抗抗体的相互结合作用，将抗体连接到所述修饰 有抗抗体的微悬臂梁上的方法为将所述修饰有抗抗体的微悬臂梁置于所述抗体的 溶液中，在30℃-37.5℃的条件下反应0.5h-2.0h；优选为在30℃-37℃的条件 下反应1h-2.0h。

上述方法中，所述抗体的溶液中所述抗体的浓度为1ug/ml-3ug/ml。

上述方法中，所述通过巯基化将抗抗体连接到带有金膜的微悬臂梁上，得到修 饰有抗抗体的微悬臂梁的方法为：将所述抗抗体利用巯基化试剂进行巯基化，得到 巯基化抗抗体，将所述带有金膜的微悬臂梁投入到巯基化抗抗体溶液中，反应，得 到修饰有抗抗体的微悬臂梁。

所述巯基化试剂包括盐酸硫醇亚胺、11-羧酸硫醇(11-MUA)、2-氨基乙硫醇 (AET)、3-巯基丙酸(MPA)、磺基羟基琥珀酰亚胺基-6-(3′，2-吡啶二硫-丙酰胺) -己酸酯(Sulfo-LC-SPDP)和3，3′-二硫双磺基琥珀酰亚胺丙酸酯(DTSSP)等。

上述方法中，所述将所述带有金膜的微悬臂梁投入到巯基化抗抗体溶液中反应 中，所述反应的条件为：温度为30-37.5℃，时间为0.5-2.0h；所述温度优选为 37℃，所述时间优选为1h。

由上述任一所述方法制备得到的修饰有抗体的微悬臂梁也属于本发明的保护 范围。

鉴于微悬臂梁免疫传感技术对抗体固定的重要性及巯基化试剂参与抗体固定 的复杂性，本发明先将抗抗体修饰到微悬臂梁上，然后通过抗抗体与抗体的特异性 识别反应相结合，将抗体固定到微悬臂梁的金膜上。结果表明，本发明所制备的修 饰有抗体的微悬臂梁的方法与现有的方法相比具有反应步骤少、操作时间短、避免 因巯基化反应对抗体活性的损失、使抗体定向结合从而暴露更多的抗原作用位点的 优点。因此，本发明的方法及产品在微悬臂梁免疫传感技术领域具有广阔的应用前 景。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1、制备修饰有羊抗鼠抗抗体的微悬臂梁