[发明专利]一种辅助诊断多发性骨髓瘤的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种辅助诊断多发性骨髓瘤的试剂盒。

背景技术

多发性骨髓瘤(multiple myeloma，MM)是浆细胞的恶性肿瘤，其特征为骨髓中 异常浆细胞恶性增殖，血清或尿中出现过量单克隆免疫球蛋白(IgG，IgA，IgD或IgE) 或Bence Jones本周蛋白质(游离的单克隆性κ或γ轻链)，常伴有多发性溶骨性 损害，高钙血症，贫血，肾脏损害，易引起肺部、泌尿系感染。在我国多发性骨髓 瘤的发病率占血液系统肿瘤的第二位，中位生存期为3～5年。目前，多发性骨髓 瘤的治疗主要包括常规化疗、干细胞移植以及新型药物治疗，如免疫调节药物、蛋 白酶体抑制剂等的应用，虽然可以使病情得到有效控制，但很少有患者能够取得完 全缓解甚至治愈。越来越多的证据表明多发性骨髓瘤细胞的基因异质性很大程度上 决定了不同的临床后果。

现在多发性骨髓瘤的诊断已经从单纯细胞形态学诊断演变为细胞生物学和临 床医学结合的综合诊断模式。常规诊断技术有各种电泳、免疫组化、流式细胞术、 PCR检测免疫球蛋白重链或轻链基因的克隆性重排等，但一直以来，缺乏多发性骨 髓瘤特异的诊断、预后分子标记和治疗监测的分子靶标，使对治疗多发性骨髓瘤的 疗效难以作出更科学的评估。

癌睾丸抗原(Cancer testis antigen，CT抗原)是一种免疫原性蛋白质，在 过去15年间已鉴定了40多个家族，基于其在肿瘤患者中的特异性表达和免疫原性， CT抗原已被认为是有应用前景的人类恶性肿瘤免疫治疗的靶标，并有可能成为重要 的诊断和预后标志。新近的研究发现MM患者中高频率表达CT抗原，且可诱导抗体 介导和T细胞介导的免疫反应。异基因干细胞移植的治疗效果一部分是由供者来源 的T细胞显示的免疫效应的结果，针对CT抗原的免疫反应，提示CT抗原可能是供 者来源同种异体免疫甚至是自发抗骨髓瘤免疫应答的天然靶标。骨髓残留恶性浆细 胞的MM患者明显持续表达CT抗原，所以CT抗原是针对微小残留病的有潜力的标 志，还可以用于靶向治疗后残存于患者骨髓中的骨髓瘤细胞。通过检测骨髓浆细胞 的数量和外周血异常蛋白水平，已发现CT抗原表达水平和骨髓瘤患者的临床病程 间有强相关性，CT抗原可能不仅是独立的肿瘤标志，而且是早期复发和生存率显著 下降的重要指标。MAGEC1/CT7(黑色素瘤抗原-C1/癌睾丸抗原7)是MM中最常见的 一种CT抗原表达，检测阳性率可达65％～82％，在肿瘤细胞中高表达，在正常细胞 中不表达，MAGEC1/CT7的肿瘤特异性的高频率且持续的表达，使其最有可能成为有 效的MM诊断、预后、疗效监测指标及免疫治疗靶标。

目前，国际上已报道的用于检测MAGEC1/CT7表达的方法主要为定性PCR和免 疫组织化学方法，这些方法普遍存在灵敏度低、特异性不高、费时费力等缺点，使 应用受到一定限制。

发明内容

本发明的目的是提供一种辅助诊断多发性骨髓瘤的试剂盒。

本发明提供的辅助诊断多发性骨髓瘤的试剂盒，包括针对MAGEC1/CT7基因的 特异性引物对甲和探针甲；所述特异性引物对甲为序列表的序列1和序列表的序列 2所示核苷酸序列组成的引物对；所述探针甲的核苷酸序列如序列表的序列3所示。

所述试剂盒还可包括阳性质粒；所述阳性质粒为含有MAGEC1/CT7基因或其片 段的重组质粒。所述阳性质粒可为含有序列7所示的MAGEC1/CT7基因片段的重组 质粒。所述阳性质粒具体可为将pMD18-T载体与序列表的序列7所示的MAGEC1/CT7 基因片段连接得到的重组质粒。

所述试剂盒可还包括针对内参基因的特异性引物对乙和探针乙；所述内参基因 为ABL基因。所述特异性引物对乙具体可为序列表的序列4和序列表的序列5所示 核苷酸序列组成的引物对；所述探针乙的核苷酸序列具体可如序列表的序列6所示。

所述试剂盒还可包括内参质粒；所述内参质粒为含有ABL基因或其片段的重组 质粒。所述内参质粒可为含有序列8所示的ABL基因片段的重组质粒。所述内参质 粒具体可为将pMD18-T载体与序列表的序列8所示的ABL基因片段连接得到的重组 质粒。

本发明还保护针对MAGEC1/CT7基因的特异性引物对甲和探针甲在制备辅助诊 断多发性骨髓瘤的试剂盒中的应用；所述特异性引物对甲为序列表的序列1和序列 表的序列2所示核苷酸序列组成的引物对；所述探针甲的核苷酸序列如序列表的序 列3所示。