[发明专利]玉米的PCR鉴定引物及鉴定方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测技术，具体地说涉及对玉米生物资源进行 检测用引物及PCR方法。

背景技术

玉米Zea mays属禾本科玉米属。全世界玉米播种面积仅次于小 麦、水稻而居第三位。我国的玉米产量居世界第二位。在我国玉米 的播种面积很大，分布也很广，是我国北方和西南山区及其它旱谷 地区人民的主要粮食之一。玉米具有很高营养价值和保健作用，其 除了含有碳水化合物、蛋白质、脂肪、胡萝卜素外，还含有核黄素、 维生素等营养物质。这些物质对预防心脏病、癌症等疾病有很大的 好处。玉米中所含的胡萝卜素，被人体吸收后能转化为维生素A， 它具有防癌作用；植物纤维素能加速致癌物质和其他毒物的排出； 天然维生素E则有促进细胞分裂、延缓衰老、降低血清胆固醇、防 止皮肤病变的功能，还能减轻动脉硬化和脑功能衰退。此外，多吃 玉米还能抑制抗癌药物对人体的副作用，刺激大脑细胞，增强人的 脑力和记忆力此外。我国是一个玉米属植物种质资源十分丰富的国 家，有许多优良品种，这些品种已成为我国许多地区生产上大量栽 培的品种，大大地促进了我国玉米相关产业的发展。随着改革开放 以来畜牧业的大发展，人民生活水平的提高，玉米工业的发展，玉 米已成为粮食、饲料、工业原料和出口商品的多用途作物。为防止 我国玉米种质资源的流失，对我国的社会生产力造成难以估量的损 失，应该加大对我国玉米资源的保护与研究工作。

现代生物技术的出现，使基因资源更多的是以非活体的遗传物 质形式携带出境，使得口岸查验更加困难，因而研究及建立有效的 遗传资源出境检验鉴定方法以及相关的能力建设就显得极为必要。

目前国内外对于Zea mays的识别仅限于形态上，利用分子标记 技术进行品种鉴定的研究很多，但是在种的水平上未见分子检测方 法的研究。

本发明应用PCR方法对玉米的分子检测方法进行研究，通过 trnL序列设计特异引物，建立了对玉米稳定、高效的鉴定方法、成 本低，可根据对扩增产物的普通琼脂糖电泳判定是否有玉米核酸存 在。

发明内容

本发明目的在于提供用于玉米PCR检测的引物及方法。

本发明通过分析玉米与其近缘种等禾本科植物叶绿体trnL基因 序列的基础上，设计特异引物，能够快速、准确地对Zea mays进行 定性检测。

本发明提供的检测引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1和2所示。

以样品总DNA为模板，上述的引物进行PCR扩增，根据PCR 扩增产物判定样品是否为玉米。即检测PCR产物中是否存在230bp 的特异性扩增。具体地说，可以利用琼脂糖凝胶电泳进行检测，根 据是否存在230bp的特异性条带，来判断样品是否为阳性。

PCR25μL反应体系：样品DNA 1μL(10-50ng)，10×PCR buffer (Mg²⁺ free)2.5μL，25mM MgCL₂ 2μL，10mM dNTPs 2μL，10μM Primers 1μL/1μL，5U/μL Taq DNA polymerase 0.1μL，ddH₂O 15.4μL。

反应条件：预变性95℃5min，再经95℃变性30sec，45℃退 火30sec，72℃延伸1min，30循环，最后72℃延伸5min。

可以将本发明引物以及相关试剂组装成试剂盒，以方便使用。

本发明建立了适合口岸应用的简便的检测方法，即直接从进、 出境的禾本科类材料上检测玉米，操作快捷、结果准确，避免了用 传统的形态分类学和细胞学方法所产生的耗费时间和易疏漏的缺 陷，顺应了当今口岸检测工作的特点。

附图说明

图1是PCR法对玉米的特异性检测结果；

其中，M为DL2,000 DNA分子量标准；1玉米，2小伞，3粗 山羊草，4黑麦，5栽培一粒，6肯农18，7日本晴，8中国春，CK 水对照。

具体实施方式

下面实施例用于对本发明的进一步说明，但不用来限制本发明 的范围。

实施例1引物的设计

根据玉米trnL序列，利用软件和Primer 3设计引物及，经过多 轮筛选，意外发现以下引物的特异性显著优于其它引物，该引物序列 为：

正向：5’-GATCTCGAAAACAATGAA-3’