[发明专利]N-酰基高丝氨酸内酯酶及其生产方法与专用重组菌

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程领域，具体地涉及一种N-酰基高丝氨酸内酯酶及其生产方法与专用重组菌。

背景技术

N-酰基高丝氨酸内酯(N-acyl-homoserine lactone)，简称AHL，是一种环状内酯类小分子物质，由一个相同的高丝氨酸内酯环和一个不同碳链长度的酰基侧链组成。AHLs是许多革兰氏阴性细菌合成的自诱导物，是细菌细胞通讯中的一类重要的信号物质，广泛存在于革兰氏阴性细菌群体感应系统中，参与调控多种致病基因的表达。AHLs可以透过细胞膜，在细胞与环境之间以及细胞之间扩散，当环境中的细菌达到一定的数量，AHLs积累到一定浓度，AHLs重新返回细菌胞内，与相关受体蛋白结合，诱导相关基因的表达，引起细菌间的群体感应现象。许多人类和动植物的病原菌的致病性依赖于AHLs的群体感应现象，如可使人患病的铜绿假单胞杆菌(Waters C M andBassler B L，Annual Review of Cell and Developmental Biology.21：319-346)；水产养殖中的主要致病菌费氏弧菌、嗜水气单胞菌等；食品腐败中的食源假单胞菌(Austin B J and Allen-Austin D，Journal of Applied Bacteriolog.y 58：483-506)；以及导致植物腐败的胡萝卜欧文氏菌等诸多致病菌的致病性均依赖AHLs调控的群体感应现象(VonBodman S B，et al.Annual review of phytopathology.41：455-482)。因此，降解AHLs，切断菌间交流，进而破坏群体感应系统，可以达到控制毒性因子表达的目的，这可能成为一种可行的防病策略。

N-酰基高丝氨酸内酯酶(N-acyl-homoserine lactonase，AHL-lactonase)是一类能够降解AHLs的水解酶，该酶将信号分子的高丝氨酸内酯环切开，生成酰化的高丝氨酸内酯。对N-酰基高丝氨酸内酯酶的研究开始于本世纪初，2000年，Yi-Hu Dong首次芽胞杆菌中克隆N-酰基高丝氨酸内酯水解酶-aiiA。研究表明N-酰基高丝氨酸内酯酶基因的转基因植物提高大白菜抗病原菌胡萝卜软腐欧文氏菌感染的能力(Dong YH，et al.Proceedings of the National Academy of Sciences.97：3526-3531)；aiiA类基因导入细菌中如铜绿假单菌(Pseudolnonas aerugjnosa PA01)中表达，大大减弱AHL信号分子的数量，显著抑制某些毒性因子和细胞毒素的产生(Reimmann C，etal.Microbiology.148：923-932)；aiiA类基因在大肠杆菌原核系统活性表达，并有效提高植物抗病能力(Dong Y H，et al.Proceedings of the National Academy ofSciences 97：3526-3531)。但是N-酰基高丝氨酸内酯酶基因在真核表达系统中如毕赤酵母表达中鲜有报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种蛋白，命名为AiiA-B546，是一种N-酰基高丝氨酸内酯酶。

本发明提供的蛋白是序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质。

上述蛋白的编码基因命名为aiia-B546，也属于本发明的保护范围之内。

本发明提供的基因来源于芽孢杆菌(Bacillus sp.)B546CGMCC 3228(已于2009年09月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCC，地址为：中国北京市朝阳区大屯路)。

上述基因具体是如下1)或2的基因：

1)编码序列是序列表中序列1的自5’端第1位-第750位所示的基因；

2)核苷酸序列是序列表中序列2所示的基因。

含有所述基因的重组载体也属于本发明的保护范围之内。

上述重组载体具体可以是将上述的基因插入pPIC9的多克隆位点得到的重组表达载体。

含有上述基因的转基因细胞系或重组菌也属于本发明的保护范围之内。

上述重组菌具体可以是将所述的基因通过所述的重组表达载体导入毕赤酵母中，得到的转基因重组菌。

上述重组菌具体是巴氏毕赤酵母(Pichia pastoris)AiiA-B546 CGMCC №.3369(已于2009年10月28日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCC，地址为：中国北京市朝阳区大屯路)。