[发明专利]花菁类化合物,包含所述化合物的组合物及其在细胞检测中的用途

说明书

技术领域

本发明涉及荧光染料。具体地讲，本发明涉及适合用于生物样品染色的花菁类化合物，包含所述花菁类化合物的组合物及其采用所述组合物检测有核红细胞同时对白细胞分类计数的方法。

背景技术

有核红细胞(NRBC)即幼稚红细胞，存在于骨髓中。正常情况下1周之内婴幼儿血液中可见到少量幼稚红细胞，而成人幼稚红细胞均存在于骨髓之中，如见于外周血则为病理现象。一旦成年人外周血中出现NRBC，则多为病理状态，常见于一些溶血性贫血、急性大量失血、严重的组织缺氧、急慢性白血病、恶性肿瘤、骨髓纤维化症等多种疾病。

在正常人体内，嗜碱性粒细胞(Baso)数量较少，仅占白细胞总数的0～1％；淋巴细胞(Lym)约占白细胞总数的20～40％，这些细胞数量的变化对于一些疾病的诊断具有重要意义，如在重金属中毒、何杰金病、慢性粒细胞白血病等疾病中，嗜碱性粒细胞的数量会明显升高；在百日咳、传染性单核细胞增多症、慢性淋巴细胞白血病、麻疹、结核、传染性肝炎等疾病中淋巴细胞会出现增高现象。

因此上述有核红细胞、嗜碱性粒细胞和淋巴细胞的准确计数具有重要的临床意义。过去，临床上经常使用一些化学染料对上述细胞进行染色手工计数，例如瑞氏-吉姆萨复合染色法等。这些方法仅能提供细胞的百分比计数，同时存在操作时间长、易受操作者主观影响等缺点，并不适合临床大规模标本的检测。

目前已有测定有核红细胞和白细胞亚类的报道，其基本方法是使用溶血剂将红细胞和血小板溶解后分别对有核红细胞或白细胞亚类进行计数，而其中大部分无法实现有核红细胞和淋巴细胞、嗜碱性粒细胞同时计数。

CN 1084473C公开了一种白细胞四分类的测量方法，使用阳离子表面活性剂、非离子表面活性剂和阴离子有机物等成分处理血样，通过收集前方低角度散射光信息和前方高角度散射光信息将淋巴细胞从白细胞中分离出来。由于使用散射法无法区分有核红细胞和淋巴细胞，所以含有有核红细胞的样本经上述试剂处理后有核红细胞会干扰淋巴细胞的分类和计数，导致淋巴细胞和WBC计数的假性增高。

US 5155044公开了一种白细胞测量试剂，其中试剂包括裂解试剂和终止试剂两个部分。前者是一种酸性低渗溶液，作用是快速溶解红细胞和血小板；后者是一种碱性盐溶液，通过改变反应溶液的pH值和渗透压阻止裂解试剂对白细胞的进一步作用，以维持白细胞的正常形态。最后搜集DC信号、散射光信号，根据上述信号的综合差异将白细胞分为五类，这种方法的优点是简单、快速，但同时测量有核红细胞比较困难。

US5538893、US5677183、US5518928分别公开了一种用于嗜碱性粒细胞的分析试剂和方法。这些专利中的试剂可将除嗜碱性粒细胞以外的白细胞裸核化，嗜碱性粒细胞保留本身的完整结构。然后通过测定细胞的阻抗或低角散射光获得细胞大小方面的信号，再通过测定细胞的侧向散射光或高角散射光获得细胞内部结构方面的信号。最后根据两种信号的综合差异即可将嗜碱性粒细胞从白细胞中分离出来，但这种方法存在一定的缺点。在遇到含有幼稚细胞或异形淋巴细胞的样本时容易将幼稚细胞和异形淋巴细胞误报为嗜碱性粒细胞，造成嗜碱性粒细胞计数的假性增加。另外在遇到含有脂肪颗粒的样本时，样本中的脂肪颗粒也可能会干扰上述方法中WBC和Baso的正确计数。

US5298426公开了一种计数NRBC的试剂和方法。该专利使用两步法测量NRBC和WBC。试剂共分两部分：第一试剂和第二试剂。第一试剂是含有一种或多种染料的酸性低渗透压溶液，作用是溶解红细胞和血小板。同时染料有针对性地与相应的细胞结合，比如有核红染料PI等、嗜酸性粒细胞/嗜碱性粒细胞染料Astrazon Yellow 3G、与所有白细胞结合的染料Acridine Red等。第二试剂是一种碱性盐溶液，主要作用是调节第一试剂的pH值和渗透压，使白细胞能保持正常的形态。最后通过搜集散射光信号和荧光信号来区分有核红细胞和白细胞。这种方法虽然实现了有核红细胞计数，但是这种试剂存在一些缺点。在第一试剂的处理过程中白细胞也受到了部分损伤，有核红染料不仅与有核红细胞核结合，同时也会进入白细胞内部与白细胞核结合，由此会导致有核红细胞计数不准确。另外这种方法需要两个步骤才能实现最终的检测结果，所以检测时间较长，在血液细胞分析仪上检测血样时会影响到整机的检测速度，同时染料的使用种类较多。