[发明专利]一种检测展青霉素的方法及其专用酶联免疫试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测展青霉素的方法及其专用酶联免疫试剂盒。

背景技术

展青霉素(Patulin，PAT)主要是由水分含量较高、营养丰富的水果及蔬菜在保存温度较高、通风不良的贮存条件下，由部分真菌(扩张青霉、展青霉、棒型青霉等)产生的一种次级代谢产物。分子式为C₇H₆O₄，熔点100℃，分子量为154，为无色针状结晶，能溶于水、乙醇、丙酮、乙酸乙酯和氯仿。Glister于1941年在牛津大学首先发现并分离纯化的。早期，展青霉素被认为是一种广谱抗生素，可用于人感冒的治疗，但随后动物实验发现，它对实验动物具有较强的急性和亚急性毒性、免疫毒性、致畸、致突变作用，从此对展青霉素的研究重点转移到其毒性及对食品和饲料的污染上。展青霉素主要污染苹果、山楂及其果汁制品，并且已成为判断苹果汁质量的一个重要指标。因此，中国和欧盟等国家规定苹果、山楂制品中展青霉素最高允许量为50μg/kg。

展青霉素的检测方法主要包括薄层色谱法(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)和气相色谱法(GC)等，但上述方法均难以实现对批量样品的快速检测。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种展青霉素半抗原化合物。

本发明所提供的展青霉素半抗原化合物，其结构式如式I所示：

展青霉素半抗原是展青霉素和戊二酸苷反应得到的，该半抗原含有活性羧基，可以与载体蛋白偶联形成包被原和免疫原。

上述式I所示化合物与载体蛋白的偶联物也属于本发明的保护范围。其中，所述载体蛋白为牛血清白蛋白(BSA)、人血清白蛋白(HSA)、鼠血清蛋白(MSA)、甲状腺蛋白(BCG)、兔血清蛋白(RSA)、血蓝蛋白(KLH)或卵清白蛋白(OVA)。

所述展青霉素半抗原与载体蛋白的偶联物是指展青霉素半抗原与载体蛋白通过活性酯法得到的产物。

上述任一所述展青霉素半抗原与载体蛋白的偶联物具体可是具有如下结构式的偶联物：

其中，n为偶联比率，为1-30中的任一自然整数。

所述用于包被的偶联物中，所述载体蛋白可为卵清蛋白、牛血清白蛋白、人血清白蛋白、鼠血清蛋白、甲状腺蛋白(BCG)、兔血清蛋白或血蓝蛋白。

上述式I所示化合物和/或上述式I所示化合物与载体蛋白的偶联物在制备展青霉素单克隆抗体中的应用也属于本发明的保护范围。

本发明的另一个目的是提供一种展青霉素单克隆抗体。

本发明所提供的展青霉素单克隆抗体，是由保藏编号为CGMCC No.3392的展青霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株PAT分泌产生的。

保藏编号为CGMCC No.3392的展青霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株PAT也属于本发明的保护范围。

上述式I所示化合物、上述式I所示化合物与载体蛋白的偶联物和/或上述展青霉素单克隆抗体在制备检测展青霉素的酶联免疫试剂盒中的应用也属于本发明的保护范围。

本发明的另一个目的是提供一种检测展青霉素的酶联免疫试剂盒。

本发明所提供的检测展青霉素的酶联免疫试剂盒，为下述1)、2)、3)或4)中任一所述酶联免疫试剂盒：

1)酶联免疫试剂盒中包括上述任一所述式I所示化合物与载体蛋白的偶联物、上述展青霉素单克隆抗体和酶标记抗抗体；其中，所述偶联物作为包被原；

2)酶联免疫试剂盒中包括上述式I所示化合物的酶标记物、上述展青霉素单克隆抗体和抗抗体；其中，所述抗抗体作为包被原；

3)酶联免疫试剂盒中包括上述式I所示化合物的酶标记物、上述展青霉素单克隆抗体；其中，所述展青霉素单克隆抗体作为包被原；

4)酶联免疫试剂盒中包括上述任一所述式I所示化合物与载体蛋白的偶联物、上述展青霉素单克隆抗体的酶标记物；其中，所述偶联物作为包被原。

上述4种试剂盒的检测原理如下：

当在酶标板微孔条上预包被展青霉素半抗原与载体蛋白的偶联物时，加入样本溶液或标准品溶液后，再加入展青霉素单克隆抗体溶液，样本中残留的展青霉素或展青霉素标准品与酶标板上包被的展青霉素半抗原与载体蛋白的偶联物竞争展青霉素单克隆抗体，加入酶标记二抗进行放大作用，用显色液显色，样本吸光值与样本中展青霉素的含量成负相关，与标准曲线比较即可得出样本中展青霉素的含量。同时也可根据酶标板上颜色的深浅，与系列浓度展青霉素标准品溶液颜色的比较可粗略判断样品中展青霉素含量的浓度范围。