[发明专利]一种葡萄糖代谢脱阻遏、高产虾青素的法夫酵母突变株MK19及其培养方法

权利要求书

1.一种葡萄糖代谢脱阻遏、高产虾青素的法夫酵母(Phaffia rhodozyma)突变株MK19，其保藏编号为CGMCC No.3445。

2.根据权利要求1所述的葡萄糖代谢脱阻遏、高产虾青素的法夫酵 母突变株MK19的培养方法，其特征在于该方法的步骤如下：

A、PDA固体斜面培养基配制如下：200g马铃薯经洗净去皮切碎后， 加水1000ml煮沸半个小时，用纱布过滤，其滤液再加20g葡萄糖，混匀 后用去离子水补充液体体积至1000ml，在温度115℃下灭菌15分钟，得 到PDA液体培养基，往该PDA液体培养基中加入15g琼脂，待琼脂溶解、 凝固后得到PDA固体培养基；

B、配制液体种子培养基：将36-44g葡萄糖、3.6-4.4g酵母粉、2.0-2.8g 尿素、1.6-2.2g磷酸二氢钾、0.4-0.6g硫酸镁七水合物溶解于蒸馏水，定溶 至1000ml，调节pH至5.8-6.2；

C、配制液体低糖发酵培养基：将36-44g葡萄糖、3.6-4.4g酵母粉、 0.4-0.8g尿素、1.6-2.2g磷酸二氢钾、0.4-0.6g硫酸镁七水合物溶解于蒸馏 水，定溶至1000ml，调节pH至5.8-6.2；

D、配制液体高糖发酵培养基：将100-120g葡萄糖、3.6-4.4g酵母粉、 0.4-0.8g尿素、1.6-2.2g磷酸二氢钾、0.4-0.6g硫酸镁七水合物溶解于蒸馏 水，定溶至1000ml，调节pH至5.8-6.2；

E、培养条件与方法

(1)固体种子活化：将含有筛选突变株MK19的菌液涂布在步骤(A) 制备的PDA固体培养基平板上，在温度21-25℃下进行斜面培养3-7天， 然后置于温度3-5℃下保存；

从PDA斜面挑取菌苔接种至新鲜PDA斜面上，再在温度24-26℃培 养3～7天，得到活化突变株MK19固体种子；

(2)液体种子活化：从上述(1)得到的活化突变株MK19固体种子挑 取两环菌苔转移到在步骤(B)制备的液体种子培养基中，在温度24-26℃及 摇床振荡速度180-220rpm下培养3天；得到的液体种子再以所述的液体 种子培养基体积计按照8-10％接种量加到所述的液体培养基中，在温度 24-26℃与振荡速度180-220rpm下培养35-40小时；采用紫外分光光度法 测定该培养液的OD值为9-12；

(3)发酵培养：上述(2)得到的活化液体种子以所述的低糖或高糖发 酵培养基体积计按照5-7％接种量接种至所述的低糖或高糖发酵培养基 中，在温度24-26℃与振荡速度200-240rpm下培养4-5天，得到所述突变 株MK19的发酵液。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于将40g葡萄糖、4.0g酵 母粉、2.4g尿素、2.0g磷酸二氢钾、0.5g硫酸镁七水合物溶于蒸馏水中， 并定容至1000ml，制备得到所述的液体种子培养基。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于将40g葡萄糖、4.0g酵 母粉、0.6g尿素、2.0g磷酸二氢钾、0.5g硫酸镁七水合物溶于蒸馏水，并 定容至1000ml中，制备得到所述的液体低糖发酵培养基。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于将100g葡萄糖、4.0g酵 母粉、0.6g尿素、2.0g磷酸二氢钾、0.5g硫酸镁七水合物溶于蒸馏水中， 并定容至1000ml，制备得到所述的液体高糖发酵培养基。

6.根据权利要求2-5中任一权利要求所述的方法，其特征在于所述 突变株MK19发酵液的虾青素含量是20-30mg/L。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于所述的虾青素含量是采 用高压液相色谱法检测的。