[发明专利]一种微生物体内合成生物柴油的方法有效
| 申请号： | 200910241540.8 | 申请日： | 2009-11-25 |
| 公开（公告）号： | CN102071228A | 公开（公告）日： | 2011-05-25 |
| 发明（设计）人： | 吕雪峰;谈晓明;段仰凯;蔡轲;朱至 | 申请（专利权）人： | 青岛生物能源与过程研究所 |
| 主分类号： | C12P7/64 | 分类号： | C12P7/64;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19 |
| 代理公司： | 中科专利商标代理有限责任公司 11021 | 代理人： | 周长兴 |
| 地址： | 266101 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 微生物 体内 合成 生物 柴油 方法 | ||
1.一种微生物体内合成生物柴油的方法，主要步骤为：
A)分别将不动杆菌蜡脂合成酶基因atfA、大肠杆菌脂酰辅酶A合成酶基因fadD、运动发酵单胞菌的丙酮酸脱羧酶基因pdc和乙醇脱氢酶基因adhB四个基因克隆到表达载体pET28b上，基因的两端分别带上NdeI和SpeI酶切位点，使上述四个基因都置于T7启动子下游，由T7启动子驱动表达；
B)通过SpeI和XbaI是同尾酶这一特点，将fadD基因插入到atfA基因片段后的SpeI位点得到质粒pXT9，将adhB基因插入到pdc基因片段后的SpeI位点得到质粒pXT10；再将pdc+adhB基因片度插入到atfA+fadD基因片段后的SpeI位点得到四个基因共表达的质粒pXT11；
C)将pXT11转入到含有质粒pMSD8和pMSD15的大肠杆菌菌株得到大肠杆菌菌株XT31；
D)大肠杆菌菌株XT31经过IPTG和阿拉伯糖诱导产生生物柴油。
2.根据权利要求1所述微生物体内合成生物柴油的方法，其中，质粒pXT11上，atfA+fadD+pdc+adhB四个基因置于同一个T7启动子的下游。
3.根据权利要求1所述微生物体内合成生物柴油的方法，其中，pMSD8和pMSD15两个质粒是分别用于在大肠杆菌中过量表达乙酰辅酶A脱羧酶和硫酯酶的。
4.根据权利要求1所述的菌株，微生物体内合成生物柴油的方法，其中，产生的生物柴油为脂肪酸乙醇酯。
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