[发明专利]水稻黑条矮缩病毒冰冻毒源的活化方法

说明书

技术领域

本发明属于生物学领域，特别是涉及一种水稻病毒冰冻毒源的活化方法。 

背景技术

水稻黑条矮缩病毒(Rice black streaked dwarf virus，RBSDV)可侵染水稻、玉米和小麦，引起水稻黑条矮缩病和玉米粗缩病。自1996年以来，在江苏、浙江、福建、江西等稻区，水稻黑条矮缩病在沉寂多年后再度爆发流行，流行地区约60％的稻田发病，一般田块株发病率10～30％，严重田块可高达40～80％以上。2004年，在浙江省中南部杂交稻种植区发病面积80万亩，仅台州市发病面积就达48万亩，占水稻播种面积的33％，损失产量2万余吨。2006～2007年在江苏桐城、盐城、泰州等地区的华粳6号、淮稻5号、II优084等水稻品种上，病株率一般在20-30％，严重的在80％左右，有的重病田病株率甚至高达90％以上。2007年仅江苏省发病面积就达30.8万亩，2008年更猛增至390.7万亩，今年有报道湖南61个县市区发现水稻黑条矮缩病，该病已成为威胁我国水稻生产的重要病毒病。 

玉米粗缩病则是一种世界性的玉米病毒病害，自1954年在我国新疆南部和甘肃西部首次发现以来，曾于上世纪90年代在我国玉米主产区严重流行，据不完全统计，1996年全国发病面积250万公顷；1997年全国发病面积也达233万公顷以上；一般田块产量损失40％～50％，发病较重的田块产量损失在80％以上，严重田块几乎毁种绝收。在沉寂几年之后，近年又再度在我国山东、河南、河北、江苏等地大爆发，并呈现逐年上升趋势，2005年在山东省发生247万亩，2006年297万亩，2007年340万亩，2008年高达1200万亩，部分田块毁种。2008年江苏省发病面积也达到了到236.89万亩，目前玉米粗缩病已成为玉米生产上最为严重的病毒病害。 

在自然情况下，这两种病害均由灰飞虱(Laodelphax striatellus Fallen)以持久性方式特异性的传播，病毒不经卵传递给下一代。带毒灰飞虱刺吸寄主植物时经口针传播病毒，一般雌虫传毒效率较雄虫高。除灰飞虱外，白脊飞虱(Unkanodes sapporona)、白带飞虱(U.albifascia)也可以传播RBSDV。由于灰飞虱传毒的瞬时性和持久性，病毒病防治药剂缺乏，防虫治病非常困难，农药的使用也存在许多弊病，因此最为经济有效的途径是利用品种自身的抗性达到主动防治病毒病害目的。灰飞虱传毒是品种抗病性评价、病毒致病性、病毒传播机制等研究的基础，由于RBSDV不能通过人工摩擦、土壤、种子等传播，仅依靠昆虫介体传播，使得植株的抗病性鉴定、致病性和传毒机制等研究难度很大。另外把病毒保存在活的水稻植株上，但传代过程中，病毒(RNA病毒)分离物发生变异的几率很高，对于大量分离物的保存也要耗费大量的人力财力。因此可靠的人工接种技术对保证RBSDV病原、抗病性鉴定、介体传毒机制等工作的连续性、重复性及准确性显得尤为重要。

发明内容

基于上述研究领域中的空白，本发明提供了水稻黑条矮缩病毒冰冻毒源的活化方法，为植物抗病性鉴定、致病力、传毒机制研究等提供接种手段。 

水稻黑条矮缩病毒冰冻毒源的活化方法，包括如下步骤：1)采集被水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)侵染的植株新鲜叶片，于-20～-70℃冰冻保存，2)将冰冻过的叶片充分吸水，喂饲传播水稻黑条矮缩病毒的介体昆虫，3)将喂饲过的介体昆虫饲养在其喜食的寄主植株上，以便渡过循回期，4)用渡过循回期的介体昆虫接种到易感染水稻黑条矮缩病毒的健康植株上，使健康植株被水稻黑条矮缩病毒侵染。 

所述步骤1的冰冻温度为-70℃。 

所述植株为水稻、玉米或小麦。 

所述介体昆虫为灰飞虱(Laodelphax striatellus Fallen)、白脊飞虱(Unkanodes sapporona)或白带飞虱(U.albifascia)。 

所述植株为水稻或玉米，所述介体昆虫为灰飞虱(Laodelphax striatellus Fallen)。 

所述步骤2的介体昆虫在喂饲前于黑暗饥饿3-5小时。 

所述步骤2的介体昆虫被喂饲48小时。 

所述健康植株为1.5-2叶期的健康植株。