[发明专利]一种快速检测牛羊源成分的方法

权利要求书

1.用于检测牛源成分的特异性引物，其特征在于，包括牛源正向外 引物COW-F3：5’-GACCCTCTTTATTATCTTTCAACT-3’，牛源反向外引物COW-B3： 5’-TCGGTTTGATGTTGGGAAT-3’，牛源正向内引物COW-FIP：5’-CTTCTCAAGGGG TGTTTTGTTTTAAAAAAAACACAACTTTTATCACAATCCA-3’，牛源反向内引物COW -BIP：5’-TTGCCTCTTTTATTACCCCTGTAATAAAAGGCTGGGGAATAGTACGAT-3’。

2.用于检测羊源成分的特异性引物，其特征在于，包括羊源正向外引 物SHEEP-F3：5’-TCGCAGTAGCTATAATCCAAG-3’，羊源反向外引物SHEEP-B3： 5’-TGAAGTGAAATCATATGATGAGG-3’，羊源正向内引物SHEEP-FIP：5’-ATGGG TTTGGTGTGTCATTATGTGAAAACCTACGTATTTACTCTCCTAGT-3’，羊源反向内引物 SHEEP-BIP：5’-TATCACATAGTAAATCCAAGCCCCTAAAAGGATGTTAGTAGGAGAGCG-3。

3.一种采用权利要求1和2所述特异性引物分别对样品中牛源和羊 源成分检测的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)采用权利要求1和2所述的两套特异引物及一种具有链置换活 性的DNA聚合酶，加入模板DNA，在63-65℃进行45-60min扩增反应， 并且在80℃持续2min，4℃保存；

其中的扩增反应体系：扩增反应的总体积为25μL，其各种成分分别 为：10×Buffer 2.5μL，4M甜菜碱6.25μL，0.2M MgSO40.25μL，引 物混合液1μL，10μM dNTPs 3.5μL，8000U/L Bs t DNA聚合酶大片段1-5 μL，模板DNA 1-5μL，用灭菌去离子水补齐到25μL；

(2)扩增反应结束，取体系液3-25μL，采用不同方法判断扩增与否， 包括：直接向扩增管中加入嵌入剂SYBR Green，通过颜色变化观察有无扩 增反应；或评估扩增副产物焦磷酸镁白色沉淀物的量来观察有无扩增反 应；或通过观察琼脂糖凝胶电泳条带判断扩增结果。

4.如权利要求3所述的检测方法，其中所述的引物混合溶液指的是 将合成的引物粉末分别配成浓度为100μM的母液，然后取外引物各1μL， 内引物各8μL，加灭菌去离子水2μL，充分混合，制得引物混合溶液。

5.如权利要求3所述的检测方法，其中嵌入剂SYBR Green加入量为 1-2μL。

6.如权利要求3所述的检测方法，其中所述的链置换活性的DNA聚 合酶为8000U/L Bst DNA聚合酶大片段1-2μL。