[发明专利]人表皮生长因子和金属硫蛋白的融合蛋白及其制备方法和应用

说明书

技术领域：

本发明属于生物技术领域，涉及一种融合蛋白，具体地本发明是一种人表皮生长因子和金属硫蛋白的融合蛋白及其制备方法和应用。

背景技术：

1962年Cohen从小鼠颌下腺中发现了表皮生长因子(EGF)，于1975年测定了EGF的氨基酸组成，而人的EGF基因是在1986年才克隆得到。天然表皮生长因子是一个53个氨基酸的蛋白质，分子量约6000道尔顿，含有三对二硫键(Cohen等，J.Biol.Chem，1962，237：1555-1562)，具有多种生物学活性(Karnes等，Epidermal growth factor and transforming growth factor alpha，1994，Raven Press，New York)。由于表皮生长因子较小，单独在大肠杆菌中表达有一定难度，但有许多在酵母和哺乳动物细胞中表达人表皮生长因子的资料。马清钧将EGF与ANG融合(CN01120099.5)表达，黄秉仁在酵母中表达EGF(97115284.5)，甘人宝(00127953.X)在大肠杆菌中分泌表达了人EGF。

1957年Margoshes发现金属硫蛋白(MT)，分子量为6500道尔顿，具有清除体内自由基、抗电离辐射、抗紫外线照射、防止机体衰老，解除重金属的毒性，治疗消化道溃疡、各种炎症以及美容护肤等方面发挥重要的作用。它结合重金属离子能力是结合一般金属离子能力的1000倍。此外，MT与细胞生长因子有协同作用，已经有利用工程菌生产MT的尝试(01128543.5，01132046.X)。

随着基因工程的发展，需要在各种系统中表达所需要的蛋白质，为满足治疗用重组蛋白质有效性的需要，在蛋白质设计和化学修饰方面，有了很大进步，融合蛋白的设计，既可以充分发挥二者的特性，也可以减少目标蛋白质的降解。本发明利用基因工程技术，针对现有EGF、MT存在的问题，对EGF进行了融合改造，所获得的新型人表皮生长因子融合蛋白，具有产量高、兼俱EGF和MT的活性，在抗辐射、解除重金属的毒性，皮肤损伤、皮肤保养和各种溃疡的治疗方面，具有很好的疗效。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种人表皮生长因子和金属硫蛋白的融合蛋白，所述的这种人表皮生长因子和金属硫蛋白的融合蛋白要解决现有技术中的单独的人表皮生长因子或金属硫蛋白在治疗烧伤、或者烫伤、或者创伤、或者溃疡的过程中效果不佳的技术问题。

本发明提供了一种人表皮生长因子和金属硫蛋白的融合蛋白，包括第一部分和第二部分，所述的第一部分为人表皮生长因子，第二部分为人金属硫蛋白。

进一步的，所述的人金属硫蛋白位于人表皮生长因子的C端。

进一步的，所述的融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No：1所示。

本发明还提供了一种分离的核酸分子，编码权利要求1所述的人表皮生长因子和金属硫蛋白的融合蛋白。

进一步的，所述的核酸分子的核苷酸序列如SEQ ID No：2所示。

进一步的，所述的融合蛋白中的人表皮生长因子的氨基酸序列如SEQ ID No：3所示。

进一步的，所述的融合蛋白中的人金属硫蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No：4所示。

本发明还提供了一种载体，所述载体含有上述的核酸分子。

本发明还提供了一种宿主细胞，所述的细胞含有上述的载体，或者所述的细胞用上述的核酸分子转化或转染。

本发明还提供了一种生产上述的人表皮生长因子和金属硫蛋白的融合蛋白的方法，包括一个克隆和培养上述的宿主细胞的过程，包括一个利用所述的宿主细胞表达所述的融合蛋白的过程，包括一个分离所述的融合蛋白的过程。

本发明还提供了上述的人表皮生长因子和金属硫蛋白的融合蛋白在制备治疗烧伤、或者烫伤、或者创伤、或者溃疡的药物中的应用。

本发明还提供了上述的人表皮生长因子和金属硫蛋白的融合蛋白在制备皮肤护理药物中的应用。

本发明还提供了一种药物组合物，含有上述的人表皮生长因子和金属硫蛋白的融合蛋白以及药学上可接受的载体或者赋形剂或者稀释剂。

本发明还提供了上述药物组合物在制备治疗烧伤、或者烫伤、或者创伤、或者溃疡的药物中的应用。

本发明还提供了上述药物组合物在制备皮肤护理药物中的应用。