[发明专利]特异性调节POKEMON基因表达的反义寡核苷酸及其应用

说明书

本申请是申请号为200810089057.8、申请日为2008年04月15日、发明创造 名称为“特异性调节POKEMON基因表达的反义寡核苷酸及其应用”的分案申请。

技术领域

本发明涉及一种特异性调节POKEMON基因表达的反义寡核苷酸及其应用。

背景技术

POKEMON是一种新发现的致癌基因，它能够导致其它致癌基因发作，最终促 使肿瘤形成。POKEMON可以使癌细胞获得抗老化和死亡的能力，因此被称为癌症 的“总开关”。非常重要的一点是细胞内Pokemon的缺失不会对细胞的正常生长造成 影响，这就为设计低副作用的特异性抗癌药物提供了可能。

Izant和Weintraub于1984年首次提出反义技术，所谓反义技术就是根据核酸间 结合碱基互补原理，用人工合成或生物合成的特定互补的反义核酸或它们的化学修饰 物与细胞内的核酸相互作用以抑制或封闭其表达。恶性肿瘤的发生与细胞内某些癌基 因的激活或某些抑癌基因的失活或缺失有关。反义核酸能特异地阻断癌基因激活后的 过度表达而不影响其他基因的正常功能，目前利用反义技术设计出与有害基因、突变 基因、非正常表达基因及其mRNA互补的反义核酸，以封闭这些基因或抑制其表达。 而反义核酸治疗肿瘤的研究主要在肿瘤细胞株、荷瘤动物和肿瘤患者三个水平上进行 应用。目前ISIS3521、ISIS5132、ISIS2503、G3139、GEM231等已进入临床试验阶 段。

天然寡核苷酸在血清中不能稳定存在，在几分钟内就会完全被降解，因此，天然 寡核苷酸不能作为反义治疗的药物。

发明内容

本发明的目的是提供一种特异性调节POKEMON基因表达的反义寡核苷酸及其 应用。

本发明所提供的反义寡核苷酸是，其分子式为下述式I至式IV中之一：

5’CxCxAxCxGyCyCyGyCyCyGyGyCyCyAxTxCxTx 3’(式I)；

5’CxGxCxTxGyAyCyGyAyAyGyTyCyGyAxTxCxTx 3’(式II)；

5’GxGxCxCxCyGyGyCyCyCyAyTyAyGyAxAxGxTx 3’(式III)；

5’TxTxCxAxGyGyTyCyGyTyAyGyTyTyGxTxGxGx 3’(式IV)；

其中，式I至式IV中，x均指硫代磷酸酯核苷间键(硫代磷酸酯键)；y均指磷 酸二酯核苷间键(磷酸二酯键)；A均指2’-脱氧腺苷；T均指2’-胸苷；C均指2’- 脱氧胞苷；G均指2’-脱氧鸟苷。

本发明所提供的上述反义寡核苷酸的应用，是其在制备对POKEMON基因表达 进行调节、调整或抑制的药物，特别是治疗POKEMON基因过表达所引起的疾病(如 恶性肿瘤)的药物中的应用。

所述药物以上述反义寡核苷酸为有效成分。

所述药物可通过经脉或皮下给药治疗；所述药物可通过局部给药治疗。

所述给药治疗可与放射疗法结合或与化学疗法结合治疗疾病。

所述给药治疗的用药剂量范围是50nmol/L---100nmol/L。

本发明的反义寡核苷酸可特异性抑制POKEMON基因的表达；本发明的反义寡 核苷酸进行了硫代磷酸酯键的修饰，其在血清和细胞那的稳定性都大大提高，并且毒 副作用很小。本发明的反义寡核苷酸可作为有效成分用于制备治疗POKEMON高表 达引起的疾病的的基因治疗药物。

具体实施方式

实施例1、特异性调节POKEMON基因表达的反义寡核苷酸的获得

1、POKEMON基因二级结构的预测和反义寡核苷酸的设计

利用工作站(www.bioinfo.rpi.edu.cn/applications/mfold)对POKEMON基因 (NM_015898)的mRNA的二级结构进行了预测。针对POKEMON基因的阅读框架， 结合其二级结构设计了四条含有18-mer的硫代反义寡核苷酸AS1～AS4(下述式I- 式IV)。并以与人任何基因都不具有同源性的18个核苷酸序列AS5作为对照。

AS1：5’CxCxAxCxGyCyCyGyCyCyGyGyCyCyAxTxCxTx 3’(式I)；

AS2：5’CxGxCxTxGyAyCyGyAyAyGyTyCyGyAxTxCxTx 3’(式II)；